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新冠疫情后，病毒核酸檢測和疫苗接種在疫情防控中發(fā)揮了重要作用，回答下列問題。

（1）新冠病毒是一種RNA病毒，檢測新冠病毒RNA（核酸檢測）可以采取RT-PCR法，該過程中需要用到的酶有
逆轉(zhuǎn)錄酶、TaqDNA聚合酶
逆轉(zhuǎn)錄酶、TaqDNA聚合酶
。
（2）為了確保新冠病毒核酸檢測的準(zhǔn)確性，在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)必須依據(jù)新冠病毒RNA中的來進(jìn)行。據(jù)圖1分析，選擇的引物是
Ⅱ、Ⅲ
Ⅱ、Ⅲ
。其作用是
使TaqDNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸
使TaqDNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸
。
（3）下表是SARS-CoV-2核酸檢測時(shí)PCR儀參數(shù)設(shè)定要求；

步驟 a、病毒cDNA合成 b、預(yù)變性 c、變性 d、？

溫度 50℃ 95℃ 95℃ 60℃

時(shí)間 15min 5min 5s 40s

循環(huán) 1 1 45

①步驟a的反應(yīng)時(shí)間要足夠長，其目的是
保證樣本中病毒RNA均能逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA
保證樣本中病毒RNA均能逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA
。
②步驟d的主要包括PCR過程的
復(fù)性、延伸
復(fù)性、延伸
階段。
（4）PCR的產(chǎn)物一般通過電泳來鑒定，結(jié)果如圖2所示。1號泳道為標(biāo)準(zhǔn)（Marker），2號泳道為陽性對照（提純的目的基因片段），3號泳道為實(shí)驗(yàn)組。標(biāo)準(zhǔn)（Marker）的實(shí)質(zhì)為不同已知長度的DNA片段混合物：3號泳道的若出現(xiàn)雜帶，原因一般有
模板受到污染；引物的特異性不強(qiáng)；復(fù)性溫度偏低；Mg²⁺濃度過高等
模板受到污染；引物的特異性不強(qiáng)；復(fù)性溫度偏低；Mg²⁺濃度過高等
（至少答出兩點(diǎn)）。
（5）某人同時(shí)進(jìn)行了新冠病毒核酸檢測和抗體檢測（檢測體內(nèi)是否有新冠病毒抗體），若核酸檢測結(jié)果為陰性而抗體檢測結(jié)果為陽性，說明
曾經(jīng)感染過新冠病毒但已康復(fù)
曾經(jīng)感染過新冠病毒但已康復(fù)
（答出1種情況即可）；若核酸檢測結(jié)果為陽性而抗體檢測為陰性，說明
己感染新冠病毒，還未康復(fù)
己感染新冠病毒，還未康復(fù)
。

【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶、TaqDNA聚合酶；Ⅱ、Ⅲ；使TaqDNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸；保證樣本中病毒RNA均能逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA；復(fù)性、延伸；模板受到污染；引物的特異性不強(qiáng)；復(fù)性溫度偏低；Mg²⁺濃度過高等；曾經(jīng)感染過新冠病毒但已康復(fù)；己感染新冠病毒，還未康復(fù)

【解答】

【點(diǎn)評】

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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：8引用：2難度：0.5

相似題

1．PCR是利用體內(nèi)DNA復(fù)制的原理，進(jìn)行生物體外復(fù)制特定 DNA片段的核酸合成技術(shù)。請回答有關(guān)問題：
（1）PCR反應(yīng)的基本步驟是變性、

、

。
（2）科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn) DNA聚合酶只能催化

方向的聚合反應(yīng)。圖1表示細(xì)胞內(nèi)染色體 DNA的半保留復(fù)制過程，有一條子鏈?zhǔn)窍群铣啥痰腄NA片段（稱為岡崎片段），再形成較長的分子，可推測參與以上過程的酶有DNA聚合酶、

、

。在PCR過程中無岡崎片段形成，原因是細(xì)胞內(nèi)染色體 DNA的復(fù)制過程特點(diǎn)是

，PCR過程的特點(diǎn)是

。
（3）雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與脫氧核苷三磷酸（dNTP）的結(jié)構(gòu)如圖2所示。已知 ddNTP按堿基互補(bǔ)配對的方式加到正在復(fù)制的子鏈中后，子鏈的延伸立即終止。現(xiàn)有一些序列為5'-GCCTAAGATCGCA-3'的DNA分子單鏈片段，通過PCR技術(shù)獲得以堿基“C”為末端（3'為堿基C）不同長度的子鏈DNA片段，將以上子鏈 DNA片段進(jìn)行電泳分離可得到

種不同長度的子鏈 DNA片段。為使實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，在PCR反應(yīng)管中除了單鏈模板、引物、DNA 聚合酶和相應(yīng)的緩沖液等物質(zhì)外，還需要加入下列哪組原料

。
A.dGTP，dATP，dTTP
B.dGTP、dATP、dTTP、dCTP、ddCTP
C.dGTP，dATP，dTTP，dCTP
D.ddGTP，ddATP，ddTTP，ddCTP
（4）如圖3為形成單鏈DNA后，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增示意圖。

催化①過程的酶是

；核酸酶H的作用是

。如果某RNA單鏈中一共有80個(gè)堿基，其中C有15個(gè)，A與U之和占該鏈堿基含量的40%，經(jīng)過以上若干過程后共獲得8個(gè)雙鏈 DNA，此過程中至少需加入G參與組成的核苷酸數(shù)量為

（以上過程不考慮引物）。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：19引用：1難度：0.7
解析
2．PCR是利用體內(nèi)DNA復(fù)制的原理，進(jìn)行生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。請回答有關(guān)問題：

（1）PCR反應(yīng)的基本步驟是變性、復(fù)性、

。
（2）雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與脫氧核苷三磷酸（dNTP）的結(jié)構(gòu)如圖2所示。已知ddNTP按堿基互補(bǔ)配對的方式加到正在復(fù)制的子鏈中后，子鏈的延伸立即終止?，F(xiàn)主有一些序列為5'-GCCTAAGATCGCA-3'的DNA分子單鏈片段，通過PCR技術(shù)獲得以堿基“C”為末端（3'為堿基C）不同長度的子鏈DNA片段，將以上子鏈DNA片段進(jìn)行電泳分離可得到

種不同長度的子鏈DNA片段。為使實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，在PCR反應(yīng)管中除了單鏈模板、引物、DNA聚合酶和相應(yīng)的緩沖液等物質(zhì)外，還需要加入下列哪組原料

。
A．dGTP、dATP、dTTP
B．dGTR、dATP、dTTP、dCTP、ddCTP
C．dGTP、dATP、dTTP、dCTP
D．ddGTP、ddATP、ddTTP、ddCTP
（3）科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)DNA聚合酶只能催化

方向的聚合反應(yīng)。圖1表示細(xì)胞內(nèi)染色體DNA的復(fù)制過程，有一條子鏈?zhǔn)窍群铣啥痰腄NA片段（稱為岡崎片段），再形成較長的分子，可推測參與以上過程的酶有DNA連接酶

、

。在PCR過程中無岡崎片段形成，原因是細(xì)胞內(nèi)染色體DNA的復(fù)制過程特點(diǎn)是

，PCR過程的特點(diǎn)是

。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：12引用：1難度：0.7
解析
3．Sanger法DNA測序技術(shù)的核心原理：由于雙脫氧核苷酸（ddNTP）的2'和3'都不含羥基，其在DNA的合成過程中不能形成磷酸二酯鍵，因此可以中斷DNA分子合成反應(yīng)。在四個(gè)含有4種脫氧核苷酸（dNTP）的DNA體外合成反應(yīng)體系中分別加入一定比例帶有放射性同位素標(biāo)記的ddNTP（分別為：ddATP，ddCTP，ddGTP和ddTTP），在PCR過程中復(fù)制隨機(jī)終止，產(chǎn)生四組不同長度的一系列終止處帶有標(biāo)記的DNA片段。然后在變性凝膠（加入尿素等堿性物質(zhì)）上進(jìn)行電泳和放射自顯影后，可以根據(jù)電泳帶的位置確定待測分子的DNA序列，具體過程見圖。
注：ddA是ddATP的縮寫形式。

（1）如圖1中Ⅰ過程橫線①中應(yīng)該加入的物質(zhì)是

，dNTP中dATP與ATP在組成上的區(qū)別是

，為什么該過程中需要添加引物？
（2）材料中提到“在變性凝膠上進(jìn)行電泳……”，請解釋“變性”

，為什么要變性處理？

。
（3）如果電泳結(jié)果如圖2所示，請寫出待測DNA分子的序列

。
（4）某同學(xué)要通過PCR技術(shù)獲得被³²P標(biāo)記且以堿基“C”為末端、不同長度的子鏈DNA片段，在反應(yīng)管中已經(jīng)有模板、引物、酶和相應(yīng)緩沖液等等，還需加入哪些原料

。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：16引用：1難度：0.7
解析

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步驟	a、病毒cDNA合成	b、預(yù)變性	c、變性	d、？
溫度	50℃	95℃	95℃	60℃
時(shí)間	15min	5min	5s	40s
循環(huán)	1	1	45