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苯丙酮尿癥是單基因遺傳病,科學(xué)家將正?;駾導(dǎo)入該病患者的細(xì)胞,以治療該病。圖甲為A、B、C三種質(zhì)粒,圖乙為含有目的基因D的DNA片段,圖丙為重組載體的示意圖。Ap為氨節(jié)青霉素抗性基因,Tc為四環(huán)素抗性基因,lacZ為藍(lán)色顯色基因,其表達(dá)產(chǎn)物可以將無色化合物X-gal轉(zhuǎn)化成藍(lán)色物質(zhì),使菌落呈藍(lán)色,EcoRI(0.7Kb)、PvuI(0.8Kb)為限制酶及其切割位點與復(fù)制原點之間的距離?;卮鹣铝袉栴}:
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(1)基因工程操作的核心步驟是
基因表達(dá)載體的構(gòu)建
基因表達(dá)載體的構(gòu)建
。圖甲中三種質(zhì)粒適宜作為運載體的是質(zhì)粒
B
B
,與另外兩種質(zhì)粒相比,其作為載體的優(yōu)點是
有標(biāo)記基因,復(fù)制原點不會被限制酶切割
有標(biāo)記基因,復(fù)制原點不會被限制酶切割

(2)獲取目的基因D時應(yīng)選擇乙圖中的
PvuI
PvuI
對其所在的DNA進(jìn)行切割。如果僅知道D基因首尾的部分核苷酸序列,根據(jù)D基因已知核苷酸序列合成
引物
引物
,利用PCR擴增目的基因。
(3)將目的基因D和甲圖中相應(yīng)質(zhì)粒連接后,得到圖丙中三種方式。為選出正向連接的重組質(zhì)粒,使用
EcoRI
EcoRI
對質(zhì)粒完全酶切后,進(jìn)行電泳分析。若是正向連接載體,電泳圖譜中出現(xiàn)長度為
1.2
1.2
Kb和
5.5
5.5
Kb兩條帶。
(4)利用自身不含lacZ基因且對抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細(xì)胞,要在已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒、已轉(zhuǎn)化的含空質(zhì)粒的受體細(xì)胞和未轉(zhuǎn)化成功的細(xì)胞中篩選出已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞的方法是
在含有氨苯青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上培養(yǎng),形成白色菌落的為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞
在含有氨苯青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上培養(yǎng),形成白色菌落的為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞
。
【答案】基因表達(dá)載體的構(gòu)建;B;有標(biāo)記基因,復(fù)制原點不會被限制酶切割;PvuI;引物;EcoRI;1.2;5.5;在含有氨苯青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上培養(yǎng),形成白色菌落的為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞
【解答】
【點評】
聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書面同意,不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:80引用:4難度:0.7
相似題
  • 1.種子大小是作物重要的產(chǎn)量性狀。研究者對野生型擬南芥(2n=10)進(jìn)行誘變篩選到一株種子增大的突變體。通過遺傳分析和測序,發(fā)現(xiàn)野生型DAI基因發(fā)生一個堿基G到A的替換,突變后的基因為隱性基因,據(jù)此推測突變體的表型與其有關(guān),開展相關(guān)實驗?;卮鹣铝袉栴}:
    (1)擬采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將野生型DAI基因轉(zhuǎn)入突變體植株,用PCR反應(yīng)擴增DAI基因,用限制性內(nèi)切核酸酶對PCR產(chǎn)物和
     
    進(jìn)行切割,用DNA連接酶將兩者連接。為確保插入的DAI基因可以正常表達(dá),其上下游序列需具備
     
    。
    (2)轉(zhuǎn)化后,T-DNA(其內(nèi)部基因在減數(shù)分裂時不發(fā)生交換)可在基因組單一位點插入也可以同時插入多個位點。在插入片段均遵循基因分離及自由組合定律的前提下,選出單端一位點插入的植株,并進(jìn)一步獲得目的基因穩(wěn)定遺傳的植株(如圖),用于后續(xù)驗證突變基因與表型的關(guān)系。
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    ①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化T0代植株并自交,將T1代種子播種在選擇培養(yǎng)基上,能夠萌發(fā)并生長的陽性個體即表示其基因組中插入了
     

    ②T1代陽性植株自交所得的T2代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基,選擇陽性率約
     
    %的培養(yǎng)基中幼苗繼續(xù)培養(yǎng)。
    ③將②中選出的T2代陽性植株
     
    (填“自交”、“與野生型雜交”或“與突變體雜交”)所得的T3代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基,陽性率達(dá)到
     
    %的培養(yǎng)基中的幼苗即為目標(biāo)轉(zhuǎn)基因植株。
    發(fā)布:2024/10/15 0:0:1組卷:9引用:1難度:0.4
  • 2.RNA沉默是雙鏈RNA被特異性的核酸酶降解,產(chǎn)生小干擾RNA(siRNA),這些siRNA與同源的靶RNA互補結(jié)合,特異降解靶RNA,從而抑制基因表達(dá)。棉蚜是棉花的主要害蟲,嚴(yán)重危害棉花的生產(chǎn)。E基因是棉蚜生長發(fā)育的重要基因,為了控制棉蚜對棉花的危害,科研人員通過轉(zhuǎn)基因技術(shù),在棉花中表達(dá)棉蚜E基因的雙鏈RNA(dsRNA),特異性抑制棉蚜內(nèi)源E基因的表達(dá)。如圖是主要流程,請回答:

    限制酶 識別序列和切點
    EcoRⅠ G↓AATTC
    KpnⅠ G↓GTACC
    BamHⅠ G↓GATCC
    XbaⅠ T↓CTAGA
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    (1)根據(jù)PCR1反應(yīng)體系中加入的引物1和2推測PCR2中加入的引物為
     
    。
    A.5'-AAATCTAGAAGCGACTCAAGATCATGGAGTAT-3'
    B.5'-AAATCTAGACTGCCACTTCTTCAACTAATTCT-3'
    C.5'-AAAGGATCCAGCGACTCAAGATCATGGAGTAT-3'
    D.5'-AAAGGATCCCTGCCACTTCTTCAACTAATTCT-3'
    (2)從理論上推測,PCR1第五輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物1的DNA片段所占的比例為
     
    。圖中正義序列和反義序列中堿基排列順序
     
    (填“大多數(shù)相同”或“大多數(shù)不同”或“相同”或“不同”)。過程①需要的工具酶除限制酶外還需要
     
    。
    (3)過程②將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到經(jīng)
     
    處理的農(nóng)桿菌菌株后,為了確定重組質(zhì)粒已經(jīng)成功轉(zhuǎn)化可以通過
     
    驗證。
    (4)過程④愈傷組織形成棉花植株的過程稱為
     
    。轉(zhuǎn)基因棉花再生植株移栽到溫室后,葉片涂抹
     
    檢測抗性,并提取DNA進(jìn)行PCR分析。
    (5)科研人員采用特定的方法大量提取成功轉(zhuǎn)化的4株棉花植株葉片的基因組DNA,用HindⅢ完全消化,消化產(chǎn)物經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜后與目的基因的探針雜交,其雜交帶結(jié)果如圖2所示(圖中數(shù)字2~5代表轉(zhuǎn)化成功的植株,數(shù)字1代表對照組)。下列有關(guān)分析正確的有
     

    ①對照組可以用非轉(zhuǎn)基因棉花的基因組DNA進(jìn)行實驗
    ②數(shù)字3所代表的植株中目的基因插入染色中的兩個不同位置
    ③選擇HindⅢ進(jìn)行消化的原因是基因組DNA中一般只有1~2切點
    ④相同位置上雜交帶對應(yīng)DNA片段的脫氧核苷酸序列相同
    (6)科研人員進(jìn)一步鑒定上述4號泳道對應(yīng)的植株,確定獲得一株轉(zhuǎn)基因抗性植株CZ4,CZ4連續(xù)自交兩代,則F2中抗性植株占比為
     
    。
    發(fā)布:2024/10/17 17:0:4組卷:11引用:1難度:0.4
  • 菁優(yōu)網(wǎng)3.某研究小組利用水稻細(xì)胞培育能產(chǎn)生HPV(人乳頭瘤病毒)-L1蛋白的水稻胚乳細(xì)胞生物反應(yīng)器,為獲得HPV-L1蛋白提供一種新的高效、低廉的途徑,用于制備HPV疫苗。其基本流程包括表達(dá)載體的構(gòu)建、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化、水稻細(xì)胞轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)基因植株的篩選等步驟,最終獲得能產(chǎn)生含HPV-L1蛋白胚乳細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因水稻?;卮鹣铝袉栴}:
    (1)PCR是獲取HPV-L1基因的一種方法,PCR反應(yīng)體系設(shè)計的兩種引物,在引物間和引物內(nèi)的堿基都不能互補,其原因是
     
    。
    (2)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化:科研人員構(gòu)建了如圖所示的表達(dá)載體,將其與經(jīng)過Ca2+處理后的農(nóng)桿菌細(xì)胞混合,隨后將菌液涂布在含
     
    的培養(yǎng)基上培養(yǎng),挑取菌落進(jìn)行PCR鑒定后再擴大培養(yǎng)待用。
    (3)水稻細(xì)胞轉(zhuǎn)化:取水稻離體組織置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基啟動子潮霉素啟動子抗性基因中發(fā)生
     
    過程形成愈傷組織。挑取生長良好的愈傷組織加入到(2)中得到的菌液中共培養(yǎng),完成轉(zhuǎn)化過程。
    (4)轉(zhuǎn)基因水稻的篩選:將轉(zhuǎn)化處理后的水稻愈傷組織放在含
     
    (抗生素)的培養(yǎng)基中選擇培養(yǎng),并誘導(dǎo)出轉(zhuǎn)基因水稻。
    (5)水稻胚乳生物反應(yīng)器具有提取和處理產(chǎn)物簡易、生產(chǎn)成本低和生物安全性高等特點,從而被廣泛應(yīng)用。請在分子水平上提出兩個提高水稻胚乳生物反應(yīng)器產(chǎn)物產(chǎn)量的思路:
     
    發(fā)布:2024/10/25 0:0:1組卷:5引用:1難度:0.5
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