RNA沉默是雙鏈RNA被特異性的核酸酶降解，產(chǎn)生小干擾RNA（siRNA），這些siRNA與同源的靶RNA互補(bǔ)結(jié)合，特異降解靶RNA，從而抑制基因表達(dá)。棉蚜是棉花的主要害蟲，嚴(yán)重危害棉花的生產(chǎn)。E基因是棉蚜生長(zhǎng)發(fā)育的重要基因，為了控制棉蚜對(duì)棉花的危害，科研人員通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)，在棉花中表達(dá)棉蚜E基因的雙鏈RNA（dsRNA），特異性抑制棉蚜內(nèi)源E基因的表達(dá)。如圖是主要流程，請(qǐng)回答：

限制酶	識(shí)別序列和切點(diǎn)
EcoRⅠ	G↓AATTC
KpnⅠ	G↓GTACC
BamHⅠ	G↓GATCC
XbaⅠ	T↓CTAGA

（1）根據(jù)PCR1反應(yīng)體系中加入的引物1和2推測(cè)PCR2中加入的引物為

AD

AD

。
A．5'-AAATCTAGAAGCGACTCAAGATCATGGAGTAT-3'
B．5'-AAATCTAGACTGCCACTTCTTCAACTAATTCT-3'
C．5'-AAAGGATCCAGCGACTCAAGATCATGGAGTAT-3'
D．5'-AAAGGATCCCTGCCACTTCTTCAACTAATTCT-3'
（2）從理論上推測(cè)，PCR1第五輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物1的DNA片段所占的比例為

31

32

31

32

。圖中正義序列和反義序列中堿基排列順序

不同

不同

（填“大多數(shù)相同”或“大多數(shù)不同”或“相同”或“不同”）。過程①需要的工具酶除限制酶外還需要

DNA連接酶

DNA連接酶

。
（3）過程②將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到經(jīng)

Ca²⁺

Ca²⁺

處理的農(nóng)桿菌菌株后，為了確定重組質(zhì)粒已經(jīng)成功轉(zhuǎn)化可以通過

卡拉霉素

卡拉霉素

驗(yàn)證。
（4）過程④愈傷組織形成棉花植株的過程稱為

再分化

再分化

。轉(zhuǎn)基因棉花再生植株移栽到溫室后，葉片涂抹

潮霉素

潮霉素

檢測(cè)抗性，并提取DNA進(jìn)行PCR分析。
（5）科研人員采用特定的方法大量提取成功轉(zhuǎn)化的4株棉花植株葉片的基因組DNA，用HindⅢ完全消化，消化產(chǎn)物經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜后與目的基因的探針雜交，其雜交帶結(jié)果如圖2所示（圖中數(shù)字2～5代表轉(zhuǎn)化成功的植株，數(shù)字1代表對(duì)照組）。下列有關(guān)分析正確的有

①②

①②

。
①對(duì)照組可以用非轉(zhuǎn)基因棉花的基因組DNA進(jìn)行實(shí)驗(yàn)
②數(shù)字3所代表的植株中目的基因插入染色中的兩個(gè)不同位置
③選擇HindⅢ進(jìn)行消化的原因是基因組DNA中一般只有1～2切點(diǎn)
④相同位置上雜交帶對(duì)應(yīng)DNA片段的脫氧核苷酸序列相同
（6）科研人員進(jìn)一步鑒定上述4號(hào)泳道對(duì)應(yīng)的植株，確定獲得一株轉(zhuǎn)基因抗性植株CZ4，CZ4連續(xù)自交兩代，則F₂中抗性植株占比為

5

8

5

8

。