獼猴桃風(fēng)味獨特,營養(yǎng)豐富,Vc含量高,是20世紀(jì)由野生到商業(yè)栽培最成功的馴化植物之一?;卮鹣铝袉栴}:
(1)獼猴桃雌雄異株,個體基因型高度雜合,可通過種內(nèi)
雜交
雜交
育種使雙親基因重組,產(chǎn)生高度變異的新品種獼猴桃。在進(jìn)行人工栽培品種與野生毛花獼猴桃遠(yuǎn)緣種間雜交時發(fā)現(xiàn)近九成種子胚發(fā)育中止,這可能是因為它們之間存在
生殖隔離
生殖隔離
。若要使該胚繼續(xù)發(fā)育獲得植株,可采用的方法是
胚離體培養(yǎng)
胚離體培養(yǎng)
。
利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將抗蟲基因?qū)氆J猴桃愈傷組織,培育出抗蟲獼猴桃新品種。
(2)若要獲得已知序列的抗蟲基因,可采用
化學(xué)合成法
化學(xué)合成法
或PCR擴(kuò)增的方法。為確??瓜x基因正確連接到農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上并保持結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,構(gòu)建表達(dá)載體時需選用2種限制酶,一般選擇的原則有
BC
BC
(多選)。
A.抗蟲基因內(nèi)每種限制酶只有一個切割位點
B.受體農(nóng)桿菌細(xì)胞中不含有該種限制酶
C.酶切后,Ti質(zhì)粒形成的兩個末端序列不相同
D.為利于切割,限制酶識別的堿基序列長度越短越好
(3)將含有重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌與獼猴桃愈傷組織混合培養(yǎng),使
T-DNA攜帶的目的基因
T-DNA攜帶的目的基因
整合到獼猴桃基因組中,完成轉(zhuǎn)化實驗。篩選出的愈傷組織經(jīng)過
再分化
再分化
形成胚狀體,可進(jìn)一步發(fā)育形成轉(zhuǎn)基因植株。
利用品質(zhì)優(yōu)良的獼猴桃與抗寒性極強(qiáng)的軟棗獼猴桃進(jìn)行體細(xì)胞雜交,得到適應(yīng)低溫地區(qū)栽種的優(yōu)良新品種,其部分過程如下:
(4)原生質(zhì)體的游離與純化:將外植體
消毒
消毒
,加入含有甘露醇溶液的
纖維素酶和果膠
纖維素酶和果膠
酶溶液中處理,一段時間后過濾取濾液。將濾液低速離心,吸除上層的細(xì)胞碎片及
酶液
酶液
,將沉淀物反復(fù)懸浮、離心,得到提純的原生質(zhì)體。為防止原生質(zhì)體
再生細(xì)胞壁
再生細(xì)胞壁
而影響融合效果,應(yīng)盡快誘導(dǎo)兩個獼猴桃品種的原生質(zhì)體融合。
(5)原生質(zhì)體融合:為增加異源融合的機(jī)會,將提取純化的兩種原生質(zhì)體
等比例
等比例
混合,通過添加適宜濃度的化學(xué)誘導(dǎo)劑
聚乙二醇
聚乙二醇
促進(jìn)融合,篩選出雜交細(xì)胞后進(jìn)一步培養(yǎng)可得到體細(xì)胞雜交植株。