聚羥基丁酸酯(PHB)是某些細(xì)菌在碳源充足,氮源缺乏狀態(tài)下產(chǎn)生的一類顆粒狀、可作為細(xì)菌體內(nèi)碳源和能量儲備物的高分子化合物,能被蘇丹染料染色,可溶于氯仿。PHB具有生物可降解性和生物相容性,用于可降解包裝材料及醫(yī)藥行業(yè)。天然菌中的PHB產(chǎn)量較低,對天然菌進(jìn)行誘變和篩選可得到高產(chǎn)PHB合成菌。
(1)PHB合成菌的分離培養(yǎng)基的成分為葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、NaCl和瓊脂,該培養(yǎng)基中氮源主要來自
蛋白胨
蛋白胨
,為使PHB合成菌胞體內(nèi)積聚更多PHB,該培養(yǎng)基成分配比的特點是
氮源較低
氮源較低
。
(2)將等濃度土壤稀釋液接種在PHB分離培養(yǎng)基上后,甲組用紫外線照射,乙組不作處理。培養(yǎng)一段時間后,發(fā)現(xiàn)甲組的菌落數(shù)少于乙組,原因是
紫外線會殺死細(xì)菌
紫外線會殺死細(xì)菌
。通過顯微觀察法初篩PHB合成菌的方法是
在培養(yǎng)基中加入蘇丹染料,然后在顯微鏡下觀察,有較多橘黃色顆粒的細(xì)菌即為PHB合成菌
在培養(yǎng)基中加入蘇丹染料,然后在顯微鏡下觀察,有較多橘黃色顆粒的細(xì)菌即為PHB合成菌
。復(fù)篩時需要提取胞體內(nèi)的PHB,方法是
細(xì)胞破碎和用氯仿來萃取PHB,從而提取胞體內(nèi)的PHB
細(xì)胞破碎和用氯仿來萃取PHB,從而提取胞體內(nèi)的PHB
。
(3)對復(fù)篩得到的A~E五個菌株單獨培養(yǎng),檢測PHB產(chǎn)量,結(jié)果如圖。A~E株菌中適于作工程菌的是
菌株D
菌株D
,其它菌株不適合作工程菌的原因是
PHB產(chǎn)量較低、不穩(wěn)定、合成效率較差
PHB產(chǎn)量較低、不穩(wěn)定、合成效率較差
。
(4)在發(fā)酵罐中連續(xù)發(fā)酵生產(chǎn)PHB時,除控制發(fā)酵溫度、pH并隨時檢測培養(yǎng)液中PHB合成菌的數(shù)量外,還應(yīng)
檢測PHB濃度、及時添加必需的營養(yǎng)組分
檢測PHB濃度、及時添加必需的營養(yǎng)組分
(答出2條)。