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索馬甜是從非洲竹芋中提取的一種天然甜味蛋白，具有甜度高、能量低等優(yōu)點(diǎn)。研究人員利用生物技術(shù)，讓索馬甜基因在微生物和動(dòng)植物細(xì)胞中表達(dá)來(lái)獲得索馬甜?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）將索馬甜基因?qū)氪竽c桿菌前，需用
Ca²⁺
Ca²⁺
處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞：若要從牛乳汁中獲得索馬甜，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)將索馬甜基因和
乳腺蛋白基因啟動(dòng)子
乳腺蛋白基因啟動(dòng)子
重組在一起，并且選用牛的
受精卵
受精卵
作為受體細(xì)胞。
（2）若將目的基因通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先將目的基因插入到農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的
T-DNA片段
T-DNA片段
中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過(guò)DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的
染色體DNA
染色體DNA
上。利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞時(shí)，
受損
受損
（填“正?！被颉笆軗p”）的植物細(xì)胞更有利于農(nóng)桿菌的侵染。
（3）導(dǎo)入索馬甜基因的植物細(xì)胞可通過(guò)脫分化形成
愈傷組織
愈傷組織
，然后經(jīng)過(guò)再分化形成轉(zhuǎn)基因植株。為避免外源基因通過(guò)花粉傳播給其他植物造成基因污染，可將外源基因?qū)胫参锛?xì)胞的
細(xì)胞質(zhì)
細(xì)胞質(zhì)
（填“細(xì)胞質(zhì)”或“細(xì)胞核”）中。

【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．

【答案】Ca²⁺；乳腺蛋白基因啟動(dòng)子；受精卵；T-DNA片段；染色體DNA；受損；愈傷組織；細(xì)胞質(zhì)

【解答】

【點(diǎn)評(píng)】

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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：16引用：2難度：0.7

相似題

1．新冠病毒（+RNA）的刺突蛋白S通過(guò)與人體黏膜細(xì)胞表面的ACE2受體結(jié)合而進(jìn)入細(xì)胞，是宿主抗體的重要作用位點(diǎn)。如圖1是科研人員利用新冠病毒的+RNA提取S蛋白基因和S蛋白受體結(jié)合域RBD基因作為抗原基因序列，研制新冠病毒雙抗原疫苗的技術(shù)路線。已知PCR1與PCR2要分別進(jìn)行，然后將產(chǎn)物混合，使用引物1和引物4進(jìn)行PCR3，最終獲得大量S-RBD融合基因（1500bp）。

（1）PCR3過(guò)程中，片段1與片段2連接形成S-RBD融合基因，需要使用

酶。為使S-RBD融合基因能與pX質(zhì)粒相連接，并在工程菌中表達(dá)時(shí)先合成S蛋白，則PCR1過(guò)程中，應(yīng)在引物1的5′端添加的限制酶序列是

。
（2）為初步檢測(cè)過(guò)程B構(gòu)建是否成功，用EcoRⅠ、NdeⅠ、HindⅢ對(duì)重組pX系列質(zhì)粒進(jìn)行完全酶切，然后對(duì)重組pX系列質(zhì)粒及其酶切產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果如圖2。據(jù)圖可知，重組質(zhì)粒pX2和pX5構(gòu)建成功的依據(jù)是

。
（3）在工程菌的篩選時(shí)，可先后用兩種抗生素進(jìn)行影印培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)（即使用無(wú)菌的絨氈布?jí)涸谂囵B(yǎng)基A的菌落上，帶出少許菌種，平移并壓在培養(yǎng)基B上），在培養(yǎng)基B中存活的菌落是否含有目的基因

（填“是”或“否”）。鑒定重組pX質(zhì)粒是否導(dǎo)入工程菌還可以采用的方法是

。
（4）試從免疫學(xué)角度分析此種雙抗原疫苗比常規(guī)S蛋白疫苗更具優(yōu)勢(shì)的原因

。
發(fā)布：2024/10/26 12:30:1組卷：14引用：3難度：0.6
解析
2．某研究小組利用水稻細(xì)胞培育能產(chǎn)生HPV（人乳頭瘤病毒）-L1蛋白的水稻胚乳細(xì)胞生物反應(yīng)器，為獲得HPV-L1蛋白提供一種新的高效、低廉的途徑，用于制備HPV疫苗。其基本流程包括表達(dá)載體的構(gòu)建、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化、水稻細(xì)胞轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)基因植株的篩選等步驟，最終獲得能產(chǎn)生含HPV-L1蛋白胚乳細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因水稻?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）PCR是獲取HPV-L1基因的一種方法，PCR反應(yīng)體系設(shè)計(jì)的兩種引物，在引物間和引物內(nèi)的堿基都不能互補(bǔ)，其原因是

。
（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化：科研人員構(gòu)建了如圖所示的表達(dá)載體，將其與經(jīng)過(guò)Ca²⁺處理后的農(nóng)桿菌細(xì)胞混合，隨后將菌液涂布在含

的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，挑取菌落進(jìn)行PCR鑒定后再擴(kuò)大培養(yǎng)待用。
（3）水稻細(xì)胞轉(zhuǎn)化：取水稻離體組織置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基啟動(dòng)子潮霉素啟動(dòng)子抗性基因中發(fā)生

過(guò)程形成愈傷組織。挑取生長(zhǎng)良好的愈傷組織加入到（2）中得到的菌液中共培養(yǎng)，完成轉(zhuǎn)化過(guò)程。
（4）轉(zhuǎn)基因水稻的篩選：將轉(zhuǎn)化處理后的水稻愈傷組織放在含

（抗生素）的培養(yǎng)基中選擇培養(yǎng)，并誘導(dǎo)出轉(zhuǎn)基因水稻。
（5）水稻胚乳生物反應(yīng)器具有提取和處理產(chǎn)物簡(jiǎn)易、生產(chǎn)成本低和生物安全性高等特點(diǎn)，從而被廣泛應(yīng)用。請(qǐng)?jiān)诜肿铀缴咸岢鰞蓚€(gè)提高水稻胚乳生物反應(yīng)器產(chǎn)物產(chǎn)量的思路：

。
發(fā)布：2024/10/25 0:0:1組卷：5引用：1難度：0.5
解析
3．α-淀粉酶被廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)過(guò)程中。為獲得催化活性高的α-淀粉酶，科研人員利用細(xì)菌進(jìn)行改造。
（1）α-淀粉酶能將

水解為低聚糖和單糖，其催化活性高低往往取決于該酶活性中心的

結(jié)構(gòu)。
（2）科研人員提取枯草芽孢桿菌的表達(dá)載體，插入大腸桿菌復(fù)制原點(diǎn)以及氨芐青霉素抗性基因，構(gòu)建如圖所示重組穿梭載體。
①根據(jù)α-淀粉酶活性中心的氨基酸序列，通過(guò)

工程得到α-淀粉酶突變基因。
②構(gòu)建圖中所示重組穿梭載體需要的酶是

。插入大腸桿菌復(fù)制原點(diǎn)的目的是

。
③將含有α-淀粉酶突變基因的重組穿梭載體導(dǎo)入

的大腸桿菌細(xì)胞中。將大腸桿菌菌液涂布于含

的選擇培養(yǎng)基上，待長(zhǎng)出菌落后，用PCR方法檢驗(yàn)成功轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。
（3）培養(yǎng)轉(zhuǎn)化成功的大腸桿菌并從中提取重組穿梭載體，導(dǎo)入枯草芽孢桿菌。將培養(yǎng)得到的枯草桿菌菌液涂布于含淀粉的培養(yǎng)基上，一段時(shí)間后選擇

的菌落，從中可篩選得到催化活性較高的α-淀粉酶。
（4）請(qǐng)舉一例說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)獲得的催化活性高的α-淀粉酶在生產(chǎn)中的應(yīng)用價(jià)值：

。
發(fā)布：2024/10/25 17:0:1組卷：13引用：1難度：0.6
解析

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