45.CAR—T細(xì)胞療法是通過設(shè)計(jì)CAR基因,并導(dǎo)入癌癥患者的T細(xì)胞中,使其轉(zhuǎn)化為CAR-T細(xì)胞,CAR-T細(xì)胞膜上的CAR蛋白與癌細(xì)胞表面抗原特異結(jié)合后,激活CAR-T細(xì)胞使其增殖、分化,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)癌細(xì)胞的特異性殺傷和記憶,主要過程如下圖。
請(qǐng)回答:
(1)要獲取CAR基因,可采取PCR技術(shù)進(jìn)行大量擴(kuò)增,前提是
。
(2)連接形成pCDH—CAR上除了目的基因外,還有一些必須的部分,比如啟動(dòng)子和終止子,其中啟動(dòng)子是
識(shí)別結(jié)合位點(diǎn)。
(3)完成過程②常用方法是
法。此外,還可以先將CAR基因整合到逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中,將CAR基因整合到T細(xì)胞的
上。
(4)檢測(cè)CAR-T細(xì)胞中的CAR基因是否表達(dá)了所采用的方法是
。
(5)在將CAR-T細(xì)胞輸給病人進(jìn)行治療之前,還需在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)。體外培養(yǎng)CAR-T細(xì)胞的培養(yǎng)液中除合成培養(yǎng)基的成分外,一般還需添加
等天然成分。