偽狂犬病與乙腦在我國豬群中廣泛存在,對養(yǎng)豬業(yè)的持續(xù)發(fā)展造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為此,研究人員擬以偽狂犬病毒為載體,構(gòu)建乙腦病毒主要免疫原性基因PrM重組病毒,為研究豬乙腦病毒與偽狂犬病毒雙價(jià)基因工程疫苗奠定基礎(chǔ)。下圖表示表達(dá)乙腦病毒PrM基因重組偽狂犬病病毒的構(gòu)建過程,PK、gG、gD為偽狂犬病的主要抗原基因,TK為偽狂犬病的毒性基因,pgG為啟動子,BamHⅠ和EcoRⅠ為兩種限制酶。請分析回答:
(1)催化過程①的酶有 反轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶反轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶,RT-PCR的進(jìn)行應(yīng)先設(shè)計(jì)針對PrM基因的特異性引物,下列可作為該過程的一對引物是 P1和P4P1和P4。
P1:5'TTGGATCCATGGAAGGCTCAATCATGTG3'
P2:5'CACAAGCTTAGATGACGTATCCAAGGAG3'
P3:5'TACGGTACCTTAGGGGTTAAGTGGG3'
P4:5'GCGAATTCTAACTGTAAGCCGGAGCG3'
(2)過程②在 DNA連接DNA連接酶的作用下可形成重組轉(zhuǎn)移載體,研究人員通過BamHⅠ和EcoRⅠ雙酶切后再電泳的方法進(jìn)行重組轉(zhuǎn)移載體的鑒定篩選,請?jiān)趫D2中畫出通用轉(zhuǎn)移載體和重組轉(zhuǎn)移載體酶切并電泳后條帶的大致位置。
(3)研究發(fā)現(xiàn),偽狂犬病毒在細(xì)胞中增殖的非必需基因占病毒基因組的一半以上,因此,以該病毒為載體的優(yōu)勢體現(xiàn)在 插入外源基因的區(qū)域多而不影響其本身的繁殖插入外源基因的區(qū)域多而不影響其本身的繁殖,過程③采用脂質(zhì)體介導(dǎo)共轉(zhuǎn)染PK-15細(xì)胞的原理是 細(xì)胞質(zhì)膜的流動性細(xì)胞質(zhì)膜的流動性。
(4)偽狂犬病毒缺失TK、gG等基因會顯著降低毒力,但不會影響自身正常繁殖,故重組病毒理論上具有的特點(diǎn)是 能侵染宿主細(xì)胞但不具有致病性能侵染宿主細(xì)胞但不具有致病性,若檢測重組病毒中PrM基因是否成功表達(dá),可采用的方法是 抗原—抗體雜交抗原—抗體雜交。
(5)該重組病毒能否直接作為基因工程疫苗投入使用,還需要進(jìn)一步探究。請你利用所學(xué)的知識簡要寫出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路:給多只健康且生理狀態(tài)相同的豬接種一定劑量的重組病毒,定期觀察其生長情況并檢測血漿中相應(yīng)的抗體水平給多只健康且生理狀態(tài)相同的豬接種一定劑量的重組病毒,定期觀察其生長情況并檢測血漿中相應(yīng)的抗體水平。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合;基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用.
【答案】反轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶;P1和P4;DNA連接;插入外源基因的區(qū)域多而不影響其本身的繁殖;細(xì)胞質(zhì)膜的流動性;能侵染宿主細(xì)胞但不具有致病性;抗原—抗體雜交;給多只健康且生理狀態(tài)相同的豬接種一定劑量的重組病毒,定期觀察其生長情況并檢測血漿中相應(yīng)的抗體水平
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布:2024/6/7 8:0:9組卷:19引用:1難度:0.5
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