近年來，基因治療作為一種新的治療手段，可以治療多種疾病。GDNF是一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，對(duì)損傷的神經(jīng)細(xì)胞具有營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)作用。研究人員構(gòu)建了含GDNF基因的表達(dá)載體（如圖所示），并導(dǎo)入到大鼠神經(jīng)干細(xì)胞中用于干細(xì)胞基因治療的研究。請(qǐng)回答下列問題：

（1）若要獲得大量GDNF基因，可通過

PCR

PCR

技術(shù)進(jìn)行體外擴(kuò)增，該技術(shù)所需的引物有

2

2

種。
（2）基因工程中，最核心的步驟是

基因表達(dá)載體的構(gòu)建

基因表達(dá)載體的構(gòu)建

（填圖中序號(hào)）；能否用限制酶XhoⅠ和EcoRⅠ同時(shí)切割目的基因和載體，并說明原因

不可以，如果使用限制酶XhoⅠ和EcoRⅠ同時(shí)切割目的基因和載體，那么重組質(zhì)粒將丟失啟動(dòng)子

不可以，如果使用限制酶XhoⅠ和EcoRⅠ同時(shí)切割目的基因和載體，那么重組質(zhì)粒將丟失啟動(dòng)子

。重組載體上啟動(dòng)子的作用是

啟動(dòng)子上有mRNA聚合酶的識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)，用于對(duì)目的基因的轉(zhuǎn)錄

啟動(dòng)子上有mRNA聚合酶的識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)，用于對(duì)目的基因的轉(zhuǎn)錄

。
（3）圖中a稱為

內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

；b將來發(fā)育為

胎膜和胎盤

胎膜和胎盤

。
（4）過程⑥產(chǎn)生的小鼠并不都是轉(zhuǎn)基因小鼠的原因是

轉(zhuǎn)基因小鼠的染色體的DNA上沒有插入目的基因，目的基因不能穩(wěn)定的表達(dá)。

轉(zhuǎn)基因小鼠的染色體的DNA上沒有插入目的基因，目的基因不能穩(wěn)定的表達(dá)。

。