β-丙氨酸不僅是一種醫(yī)藥中間體,還可以作為食品添加劑,改善食物味道,提高產(chǎn)品質(zhì)量。可運用構(gòu)建L-天冬氨酸α-脫羧酶大腸桿菌的方式生產(chǎn)該氨基酸,制備工程菌的示意圖如圖所示,回答下列問題:
(1)構(gòu)建工程菌主要需要四個步驟:目的基因的獲取目的基因的獲取→基因表達載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)胧荏w細胞將目的基因?qū)胧荏w細胞→目的基因的檢測與鑒定。
(2)構(gòu)建成功的C除含有目的基因外,還應(yīng)含有 啟動子、終止子、標(biāo)記基因啟動子、終止子、標(biāo)記基因(答出三點即可)。該過程分別對質(zhì)粒和含目的基因的片段進行雙酶切,雙酶切的優(yōu)點是 防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及反向連接防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及反向連接。
(3)為了確定工程菌中的L-天冬氨酸α-脫羧酶基因是否轉(zhuǎn)錄,可用同位素或熒光標(biāo)記的 L—天冬氨酸α—脫羧酶基因單鏈L—天冬氨酸α—脫羧酶基因單鏈作探針進行分子雜交檢測。
(4)若要通過基因工程的方法探究L-天冬氨酸α-脫羧酶基因能否在酵母菌中表達,實驗思路是 將L—天冬氨酸α—脫羧酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌,檢測酵母菌中β—丙氨酸的含量將L—天冬氨酸α—脫羧酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌,檢測酵母菌中β—丙氨酸的含量。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】目的基因的獲?。粚⒛康幕?qū)胧荏w細胞;啟動子、終止子、標(biāo)記基因;防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及反向連接;L—天冬氨酸α—脫羧酶基因單鏈;將L—天冬氨酸α—脫羧酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌,檢測酵母菌中β—丙氨酸的含量
【解答】
【點評】
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