腸道病毒EV71是RNA病毒，其表面蛋白為VP1～VP4，分別由V1～V4基因控制。為研究VP1～VP4的抗原性，從中篩選出EV71的疫苗抗原，研究人員利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)了上述4種蛋白質(zhì)。如圖是制備V1基因表達(dá)載體的過程示意圖，請回答下列問題：
gus：控制合成的酶使β-葡萄糖苷酸水解為藍(lán)色物質(zhì)
Kan：卡那霉素抗性基因
（1）以RNA為模板，通過4組RT-PCR可分別獲取V1～V4基因（DNA）。RT-PCR所需要的酶有 逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶，該過程中子鏈延伸時所需的能量較為特殊，一般來自 dNTPdNTP。
（2）為方便目的基因與質(zhì)粒的連接，通常將限制酶的切點(diǎn)設(shè)計在引物上。引物一般為單鏈DNA，新合成子鏈的延伸方向為5′→3′。PCR獲取V1基因時，10引物中限制酶切點(diǎn)的堿基序列應(yīng)設(shè)計為上游引物3′…GGATCCGGATCC…5′，下游引物3′…CTCGAGCTCGAG…5′。
（3）用相關(guān)限制酶處理質(zhì)粒和V1基因后，再與 DNA連接DNA連接酶混合，加入大腸桿菌溫育。一段時間后，將菌液涂布在含有 β—葡萄糖苷酸β—葡萄糖苷酸和 卡那霉素卡那霉素的平板上，經(jīng)培養(yǎng)，在平板上長出白色和藍(lán)色兩種菌落，其中 白色白色菌落含有V1基因表達(dá)載體，判斷依據(jù)是 構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時切除了gus含基因，在含β—葡萄糖苷酸的培養(yǎng)基上，含重組V1基因質(zhì)粒的大腸桿菌不顯藍(lán)色構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時切除了gus含基因，在含β—葡萄糖苷酸的培養(yǎng)基上，含重組V1基因質(zhì)粒的大腸桿菌不顯藍(lán)色。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶；dNTP；GGATCC；CTCGAG；DNA連接；β—葡萄糖苷酸；卡那霉素；白色；構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時切除了gus含基因，在含β—葡萄糖苷酸的培養(yǎng)基上，含重組V1基因質(zhì)粒的大腸桿菌不顯藍(lán)色
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：10引用：1難度：0.6
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1．科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因（SLA-2基因），構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體，進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實驗的主要流程如圖1，SLA-2基因長度為1100bp,質(zhì)粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點(diǎn)后的數(shù)字表示距復(fù)制原點(diǎn)的距離。請回答：
（1）過程①中，PCR擴(kuò)增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識別序列及切割位點(diǎn) T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應(yīng)選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是，該過程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳，請在答題紙相應(yīng)位置畫出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對真核細(xì)胞進(jìn)行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒有抗性的細(xì)胞死亡又不會讓。實驗結(jié)果如圖2，根據(jù)實驗結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測腎上皮細(xì)胞生產(chǎn)的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：41引用：3難度：0.6 -
2．以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù)，其中說法正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
3．下列關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”的實驗，說法錯誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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