神經(jīng)纖毛蛋白-1（NRP-1）能在腫瘤細胞內(nèi)表達，是血管內(nèi)皮生長因子家族成員的受體，通過參與多種信號轉導來促進腫瘤血管的生成。研究人員從腫瘤細胞中擴增出NRP-1基因并將其導入大腸桿菌體內(nèi)進行發(fā)酵培養(yǎng)，分離提純相應NRP-1，并將其免疫小鼠，以制備抗NRP-1的單克隆抗體（NRP-1MAb）。分析回答下列問題：
（1）利用PCR技術可以從腫瘤細胞的基因組中分離擴增得到完整的NRP-1基因，其原因是根據(jù)目的基因兩端的堿基序列制備兩種引物，PCR技術根據(jù)DNA雙鏈復制的原理擴增目的基因根據(jù)目的基因兩端的堿基序列制備兩種引物，PCR技術根據(jù)DNA雙鏈復制的原理擴增目的基因。將擴增后的目的基因構建成表達載體后，導入用鈣離子溶液鈣離子溶液處理的大腸桿菌體內(nèi)完成轉化。
（2）研究人員將分離提純的NRP-1免疫小鼠后，取其脾臟中B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，用特定的選擇培養(yǎng)基進行篩選，在該培養(yǎng)基上不能存活的是未融合細胞、B淋巴細胞自身融合的細胞和骨髓瘤細胞自身融合的細胞未融合細胞、B淋巴細胞自身融合的細胞和骨髓瘤細胞自身融合的細胞。選取檢測抗體陽性的雜交瘤細胞進行體外培養(yǎng)時需要的氣體環(huán)境是95%的空氣和5%的二氧化碳95%的空氣和5%的二氧化碳。
（3）為進一步確定NRP-1MAb靶向治療時的用藥方式，研究人員將直腸癌組織塊制成單細胞懸液，等量注入4組裸鼠右前腋下，接種3后天開始向培養(yǎng)液中施加NRP-1MAb藥物，每隔10天給藥1次，共4次。給藥后測算一次腫瘤體積，結果如圖所示：
分析如圖可以得出的結論是多次注射NRP-1MAb可明顯抑制腫瘤生長，且高劑量組與中劑量組的抑制效果基本相同多次注射NRP-1MAb可明顯抑制腫瘤生長，且高劑量組與中劑量組的抑制效果基本相同。根據(jù)實驗結果，請給出使用NRP-1MAb進行靶向治療癌癥時的臨床建議：采用中劑量，每10天注射一次，連續(xù)注射4次采用中劑量，每10天注射一次，連續(xù)注射4次。
【考點】單克隆抗體及其應用；目的基因的篩選與獲取．
【答案】根據(jù)目的基因兩端的堿基序列制備兩種引物，PCR技術根據(jù)DNA雙鏈復制的原理擴增目的基因；鈣離子溶液；未融合細胞、B淋巴細胞自身融合的細胞和骨髓瘤細胞自身融合的細胞；95%的空氣和5%的二氧化碳；多次注射NRP-1MAb可明顯抑制腫瘤生長，且高劑量組與中劑量組的抑制效果基本相同；采用中劑量，每10天注射一次，連續(xù)注射4次
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：22引用：1難度：0.6
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1．為實現(xiàn)對肝癌的有效治療，研究人員通過比較肝腫瘤細胞和正常細胞間的差異，篩選有效的免疫治療靶點，制備相應單克隆抗體并構建抗體—藥物偶聯(lián)物。
（1）檢測發(fā)現(xiàn)細胞的CLDN6蛋白能夠促進腫瘤發(fā)生，選定其作為單克隆抗體的作用靶點。CLDN6蛋白是一個跨膜蛋白，包括胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)，制備免疫小鼠所用的抗原時，應提取區(qū)基因序列用于設計抗原。
（2）將CLDN6蛋白抗原注射到小鼠體內(nèi)，從該小鼠脾臟中獲取細胞，誘導其與骨髓瘤細胞融合，利用篩選得到雜交瘤細胞，經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體陽性檢測，多次篩選得到產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細胞，最終通過體內(nèi)或體外培養(yǎng)獲得大量單克隆抗體。
（3）將該單克隆抗體與抗癌藥物DMI 結合構建抗體—藥物偶聯(lián)物（CLDN6-DMI）。用不同濃度的游離DMI、CLDN6-DMI或lgG-DMI（無關抗體-DMI）分別處理高表達CLDN6細胞和低表達CLDN6細胞，檢測細胞活力，結果如圖1：
由圖可知，CLDN6-DMI能特異性殺傷高表達CLDN6細胞，依據(jù)是。
（4）如圖2表示抗體—藥物偶聯(lián)物CLDN6-DMI的作用機制：由圖分析，CLDN6-DMI能特異性殺傷高表達CLDN6細胞的原因是。發(fā)布：2024/12/19 7:0:1組卷：3引用：1難度：0.6 -
2．為減少鼠源單克隆抗體可能引起的副作用，某研究團隊對鼠源單克隆抗體F進行改造，制備了人—鼠嵌合抗體F′，具體流程為：提取鼠源雜交瘤細胞RNA，逆轉錄后通過PCR擴增抗體F的基因序列，將其部分序列用人的相應抗體基因序列進行替換，再構建表達載體，在體外制備人﹣鼠嵌合抗體F′。為檢測抗體性質，他們測定了F′單獨與抗原作用時對抗原的結合能力以及F′和F同時與抗原作用（F′與F初始濃度相同）時F′對抗原的結合能力，結果如下圖所示。下列敘述錯誤的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202304/369/62ee43c5.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/19 1:0:1組卷：39引用：4難度：0.5 -
3．2020年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎授予發(fā)現(xiàn)丙肝病毒的三位科學家。丙肝病毒引起的丙型肝炎可導致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，部分患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝癌。如圖為利用小鼠甲為實驗材料研制丙肝病毒的單克隆抗體的實驗流程。下列敘述錯誤的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/19 6:0:1組卷：42引用：2難度：0.6
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