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常見的探針有核酸探針和蛋白質(zhì)探針。兩種探針結(jié)構(gòu)和功能均不相同,故而應(yīng)用在不同的檢測中。而兩種探針的制備過程中所應(yīng)用的技術(shù)也不相同。請回答下列問題。
Ⅰ、蛋白質(zhì)探針的制備。
(1)蛋白質(zhì)探針常用
單克隆抗體
單克隆抗體
技術(shù)來制備。該技術(shù)的基本流程是將
特定的抗原
特定的抗原
注射給實驗動物,獲取的脾細胞與骨髓瘤細胞融合后,用HAT培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)對象。該篩選過程得到的雜交瘤細胞是產(chǎn)生
抗體
抗體
的雜交瘤細胞,接下來要經(jīng)過
抗體
抗體
檢測來獲得產(chǎn)生特定蛋白的雜交瘤細胞。最終將純化得到的特定蛋白結(jié)合上熒光或放射性標記,即為蛋白質(zhì)探針。
(2)上述HAT培養(yǎng)基是
液體
液體
(填“液體”或“固體”)培養(yǎng)基。融合成雜交瘤細胞后再檢測尋找產(chǎn)生特定目標蛋白的雜交瘤細胞,而不直接在脾細胞中尋找產(chǎn)生特定蛋白的B淋巴細胞的原因是
B淋巴細胞不能分裂,不具備克隆化的能力,培養(yǎng)產(chǎn)生的抗體濃度低,不足以檢測
B淋巴細胞不能分裂,不具備克隆化的能力,培養(yǎng)產(chǎn)生的抗體濃度低,不足以檢測
。
Ⅱ、不對稱PCR是利用不等量的一對引物來產(chǎn)生大量單鏈DNA(ssDNA)的方法。該方法制備的ssDNA結(jié)合上熒光或放射性標記,即為核酸探針。
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(3)不對稱PCR中加入的一對引物中含量較少的被稱為限制性引物,含量較多的被稱為非限制性引物。兩者的比例通常為1:100。PCR反應(yīng)的最初的若干次循環(huán)中,其擴增產(chǎn)物主要是雙鏈DNA(dsDNA),但當限制性引物消耗完后,就會產(chǎn)生大量的ssDNA。據(jù)下圖可知,最后大量獲得的ssDNA是圖中的
(填“甲”或“乙”)鏈。
(4)若反應(yīng)最初有a個模板DNA分子,最初的6次循環(huán)擴增產(chǎn)生dsDNA,后10個循環(huán)均只擴增ssDNA,則需要限制性引物
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a
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個。請繪制這16個循環(huán)中ssDNA的分子數(shù)量隨循環(huán)次數(shù)的變化圖2。(說明:縱軸的刻度請自行標注。)

【答案】單克隆抗體;特定的抗原;抗體;抗體;液體;B淋巴細胞不能分裂,不具備克隆化的能力,培養(yǎng)產(chǎn)生的抗體濃度低,不足以檢測;甲;
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【解答】
【點評】
聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書面同意,不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布:2024/9/12 1:0:10組卷:1引用:1難度:0.5
相似題
  • 1.為實現(xiàn)對肝癌的有效治療,研究人員通過比較肝腫瘤細胞和正常細胞間的差異,篩選有效的免疫治療靶點,制備相應(yīng)單克隆抗體并構(gòu)建抗體—藥物偶聯(lián)物。
    (1)檢測發(fā)現(xiàn)細胞的CLDN6蛋白能夠促進腫瘤發(fā)生,選定其作為單克隆抗體的作用靶點。CLDN6蛋白是一個跨膜蛋白,包括胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū),制備免疫小鼠所用的抗原時,應(yīng)提取
     
    區(qū)基因序列用于設(shè)計抗原。
    (2)將CLDN6蛋白抗原注射到小鼠體內(nèi),從該小鼠脾臟中獲取
     
    細胞,誘導(dǎo)其與骨髓瘤細胞融合,利用
     
    篩選得到雜交瘤細胞,經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體陽性檢測,多次篩選得到產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細胞,最終通過體內(nèi)或體外培養(yǎng)獲得大量單克隆抗體。
    (3)將該單克隆抗體與抗癌藥物DMI 結(jié)合構(gòu)建抗體—藥物偶聯(lián)物(CLDN6-DMI)。用不同濃度的游離DMI、CLDN6-DMI或lgG-DMI(無關(guān)抗體-DMI)分別處理高表達CLDN6細胞和低表達CLDN6細胞,檢測細胞活力,結(jié)果如圖1:
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    由圖可知,CLDN6-DMI能特異性殺傷高表達CLDN6細胞,依據(jù)是
     
    。
    (4)如圖2表示抗體—藥物偶聯(lián)物CLDN6-DMI的作用機制:由圖分析,CLDN6-DMI能特異性殺傷高表達CLDN6細胞的原因是
     
    。

    發(fā)布:2024/12/19 7:0:1組卷:3引用:1難度:0.6
  • 2.為減少鼠源單克隆抗體可能引起的副作用,某研究團隊對鼠源單克隆抗體F進行改造,制備了人—鼠嵌合抗體F′,具體流程為:提取鼠源雜交瘤細胞RNA,逆轉(zhuǎn)錄后通過PCR擴增抗體F的基因序列,將其部分序列用人的相應(yīng)抗體基因序列進行替換,再構(gòu)建表達載體,在體外制備人﹣鼠嵌合抗體F′。為檢測抗體性質(zhì),他們測定了F′單獨與抗原作用時對抗原的結(jié)合能力以及F′和F同時與抗原作用(F′與F初始濃度相同)時F′對抗原的結(jié)合能力,結(jié)果如下圖所示。下列敘述錯誤的是( ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202304/369/62ee43c5.png" style="vertical-align:middle" />

    發(fā)布:2024/12/19 1:0:1組卷:39引用:4難度:0.5
  • 3.2020年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎授予發(fā)現(xiàn)丙肝病毒的三位科學(xué)家。丙肝病毒引起的丙型肝炎可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化,部分患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝癌。如圖為利用小鼠甲為實驗材料研制丙肝病毒的單克隆抗體的實驗流程。下列敘述錯誤的是( ?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布:2024/12/19 6:0:1組卷:42引用:2難度:0.6
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