抗菌肽通常是由短氨基酸序列構(gòu)成的小分子肽，具有廣譜抗菌活性，對病毒和癌細(xì)胞 都有一定的殺傷力，科研人員將抗菌肽基因?qū)氪竽c桿菌細(xì)胞內(nèi)獲得了能高效表達(dá)抗菌肽的工程菌。請回答下列問題。
（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增抗菌肽基因時，設(shè)計(jì)的引物之間不能

堿基互補(bǔ)配對

堿基互補(bǔ)配對

，以避免引物自連。反應(yīng)體系中，使模板DNA解旋的操作方法是

加熱至90?95℃

加熱至90?95℃

，加入的Taq酶所起的作用是

保證在高溫條件下從引物起始進(jìn)行DNA子鏈的合成

保證在高溫條件下從引物起始進(jìn)行DNA子鏈的合成

。
（2）大腸桿菌含有許多蛋白酶，在制備抗菌肽目的基因表達(dá)載體時宜選用分泌型載體。分泌型載體能將抗菌肽在信號序列的指引下運(yùn)出細(xì)胞外，使用分泌型載體的突出優(yōu)點(diǎn)是

能防止抗菌肽被大腸桿菌細(xì)胞中的蛋白酶水解

能防止抗菌肽被大腸桿菌細(xì)胞中的蛋白酶水解

。將基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌前，需要用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理大腸桿菌制備

感受態(tài)

感受態(tài)

細(xì)胞。
（3）抗菌肽本身對大腸桿菌具有一定的殺傷性，對抗菌肽的分子構(gòu)造進(jìn)行改造，可得到對大腸桿菌殺傷性小的抗菌肽。該改造技術(shù)直接改造的對象是

抗菌肽基因

抗菌肽基因

。