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IKK激酶由IKKα、IKKβ和IKKγ三種亞基組成,該酶參與動(dòng)物體內(nèi)免疫細(xì)胞的分化。臨床上發(fā)現(xiàn)某重癥聯(lián)合免疫缺陷(SCID)患兒IKKB基因編碼區(qū)第1183位堿基T突變?yōu)镃,導(dǎo)致IKKβ上第395位酪氨酸被組氨酸代替。為研究該患兒發(fā)病機(jī)制,研究人員應(yīng)用大引物PCR定點(diǎn)誘變技術(shù)培育出SCID模型小鼠,主要過程如圖1、2。
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(1)在PCR反應(yīng)體系中,需要加入引物和IKKB基因外,還需要加入
Taq酶(耐高溫DNA聚合酶)、4種脫氧核苷酸
Taq酶(耐高溫DNA聚合酶)、4種脫氧核苷酸
等。在圖1獲取突變基因過程中,需要以下3種引物:
引物A:5'-CCCCAACCGGAAAGTGTCA-3'(下劃線字母為突變堿基)
引物B:5'-TAAGCTTCGAACATCCTA-3'(下劃線部分為限制酶HindⅢ識(shí)別序列)
引物C:5'-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3'(下劃線部分為限制酶SacⅠ識(shí)別序列)
則PCR1中使用的引物有
引物A和引物C
引物A和引物C
,PCR2中使用的引物有
引物B
引物B
和圖中大引物的
(填“①”或“②”)鏈。
(2)圖2模型鼠培育過程中雜合模型鼠(F0)的培育涉及了一系列現(xiàn)代生物技術(shù),如表是其中的一些步驟,請(qǐng)根據(jù)題意完成表格內(nèi)容。
過程 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/td> 步驟要點(diǎn)
導(dǎo)入 a.處理突變基因與載體
利用限制酶(SacⅠ、HindⅢ)分別處理突變基因和載體
利用限制酶(SacⅠ、HindⅢ)分別處理突變基因和載體
b.構(gòu)建重組載體 利用DNA連接酶催化突變基因和載體連接
c.導(dǎo)入目的基因
利用顯微注射法將重組載體注入小鼠受精卵
利用顯微注射法將重組載體注入小鼠受精卵
發(fā)育 d.獲取早期胚胎 利用專用培養(yǎng)液培養(yǎng)受精卵,并檢測(cè)其發(fā)育狀況
e.代孕獲得小鼠 利用合適的早期胚胎進(jìn)行胚胎移植
f.鑒定、篩選F0小鼠 利用PCR鑒定基因,篩選出雜合鼠F0
(3)根據(jù)圖2雜交結(jié)果,可以確認(rèn)突變基因已經(jīng)較穩(wěn)定地整合到小鼠細(xì)胞的染色體上,在遺傳時(shí)遵循
基因分離
基因分離
定律。研究人員對(duì)三種基因型小鼠胸腺淋巴細(xì)胞中組成IKK激酶的三種亞基進(jìn)行提純和電泳,結(jié)果如圖3。請(qǐng)依據(jù)此結(jié)果提出SCID患者免疫缺陷產(chǎn)生的機(jī)制:
IKKB基因突變導(dǎo)致IKKβ含量減少,IKK激酶活力降低,T細(xì)胞減少
IKKB基因突變導(dǎo)致IKKβ含量減少,IKK激酶活力降低,T細(xì)胞減少

【答案】Taq酶(耐高溫DNA聚合酶)、4種脫氧核苷酸;引物A和引物C;引物B;②;利用限制酶(SacⅠ、HindⅢ)分別處理突變基因和載體;利用顯微注射法將重組載體注入小鼠受精卵;基因分離;IKKB基因突變導(dǎo)致IKKβ含量減少,IKK激酶活力降低,T細(xì)胞減少
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書面同意,不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:16引用:2難度:0.7
相似題
  • 1.目前,科學(xué)家已在牛和山羊等動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器中表達(dá)出了抗凝血酶、血清白蛋白等多種蛋白類藥物.下列與之相關(guān)的說法,正確的是( ?。?/h2>

    發(fā)布:2024/10/26 17:0:2組卷:5引用:1難度:0.9
  • 2.最近,科學(xué)家培育出一種轉(zhuǎn)基因小鼠,其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長激素并將其分泌到尿液中.這是繼哺乳動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器研發(fā)成功后,在膀胱生物反應(yīng)器研究上另一進(jìn)展.
    (1)將人的生長激素基因?qū)胄∈笫荏w細(xì)胞,常用的方法是
     
    .所使用到儀器是
     

    (2)在基因工程中,將目的基因與運(yùn)載體結(jié)合時(shí),必須用
     
    酶和
     
    酶.常用的運(yùn)載體有
     
    、
     
    、
     
    等,而作為運(yùn)載體必須具備相應(yīng)的條件,例如應(yīng)具有
     
    以便進(jìn)行篩選.進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移時(shí),通常要將外源基因轉(zhuǎn)入動(dòng)物的
     
    中,原因是
     

    (3)通常采用
     
    技術(shù)檢測(cè)外源基因是否插入了小鼠的基因組中.
    (4)在研究膀胱生物反應(yīng)器時(shí),應(yīng)使外源基因在小鼠的
     
    細(xì)胞中特異性表達(dá).
    (5)如果將藥物蛋白基因轉(zhuǎn)入動(dòng)物如牛、羊的膀胱上皮細(xì)胞中,從轉(zhuǎn)基因牛、羊尿液中提取藥物比從乳汁中提取藥物的更大優(yōu)越性在于
     

    發(fā)布:2024/10/26 17:0:2組卷:3引用:1難度:0.3
  • 3.抗凝血酶是一種天然抗凝血?jiǎng)?,在臨床上被廣泛應(yīng)用。目前科學(xué)家已在豬和羊等動(dòng)物的乳腺生物反應(yīng)器中表達(dá)出了人的抗凝血酶,如圖是構(gòu)建抗凝血酶基因表達(dá)載體所用的pBR質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)及人抗凝血酶基因所在的DNA片段,回答下列問題:
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    (1)現(xiàn)有以下4種引物,引物A15'-GGACCCCGGG-3';引物B:5'-CATTTCTAGA-3';引物C:5'-CCTGGGGCCC-3';引物D:5'-GTAAAGATCT-3';,利用PCR擴(kuò)增獲取抗凝血酶基因,應(yīng)選用引物
     
    (填引物名稱),擴(kuò)增產(chǎn)物可選擇限制酶
     
    切割后再利用E?coliDNA連接酶連接到pBR質(zhì)粒上。
    (2)所選用的pBR質(zhì)粒上含有啟動(dòng)子,其作用是
     
    ,將構(gòu)建的基因表達(dá)載體先導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞,然后將大腸桿菌涂布到含新霉素的選擇培養(yǎng)基上,長出了多個(gè)大腸桿菌菌落,這些菌落并非都是目的菌株,原因是
     
    。
    (3)將篩選得到的目的菌株提取質(zhì)粒,再通過
     
    方法導(dǎo)入到豬或羊的
     
    細(xì)胞內(nèi),通過培養(yǎng)即可獲得能表達(dá)人抗凝血酶的乳腺生物反應(yīng)器。

    發(fā)布:2024/10/26 17:0:2組卷:4引用:1難度:0.6
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