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IKK激酶由IKKα、IKKβ和IKKγ三種亞基組成,該酶參與動物體內(nèi)免疫細(xì)胞的分化。臨床上發(fā)現(xiàn)某重癥聯(lián)合免疫缺陷(SCID)患兒IKKB基因編碼區(qū)第1183位堿基T突變?yōu)镃,導(dǎo)致IKKβ上第395位酪氨酸被組氨酸代替。為研究該患兒發(fā)病機(jī)制,研究人員應(yīng)用大引物PCR定點(diǎn)誘變技術(shù)培育出SCID模型小鼠,主要過程如圖1、2。
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(1)在PCR反應(yīng)體系中,需要加入引物和IKKB基因外,還需要加入
Taq酶(耐高溫DNA聚合酶)、4種脫氧核苷酸
Taq酶(耐高溫DNA聚合酶)、4種脫氧核苷酸
等。在圖1獲取突變基因過程中,需要以下3種引物:
引物A:5'-CCCCAACCGGAAAGTGTCA-3'(下劃線字母為突變堿基)
引物B:5'-TAAGCTTCGAACATCCTA-3'(下劃線部分為限制酶HindⅢ識別序列)
引物C:5'-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3'(下劃線部分為限制酶SacⅠ識別序列)
則PCR1中使用的引物有
引物A和引物C
引物A和引物C
,PCR2中使用的引物有
引物B
引物B
和圖中大引物的
(填“①”或“②”)鏈。
(2)圖2模型鼠培育過程中雜合模型鼠(F0)的培育涉及了一系列現(xiàn)代生物技術(shù),如表是其中的一些步驟,請根據(jù)題意完成表格內(nèi)容。
過程 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/td> 步驟要點(diǎn)
導(dǎo)入 a.處理突變基因與載體
利用限制酶(SacⅠ、HindⅢ)分別處理突變基因和載體
利用限制酶(SacⅠ、HindⅢ)分別處理突變基因和載體
b.構(gòu)建重組載體 利用DNA連接酶催化突變基因和載體連接
c.導(dǎo)入目的基因
利用顯微注射法將重組載體注入小鼠受精卵
利用顯微注射法將重組載體注入小鼠受精卵
發(fā)育 d.獲取早期胚胎 利用專用培養(yǎng)液培養(yǎng)受精卵,并檢測其發(fā)育狀況
e.代孕獲得小鼠 利用合適的早期胚胎進(jìn)行胚胎移植
f.鑒定、篩選F0小鼠 利用PCR鑒定基因,篩選出雜合鼠F0
(3)根據(jù)圖2雜交結(jié)果,可以確認(rèn)突變基因已經(jīng)較穩(wěn)定地整合到小鼠細(xì)胞的染色體上,在遺傳時(shí)遵循
基因分離
基因分離
定律。研究人員對三種基因型小鼠胸腺淋巴細(xì)胞中組成IKK激酶的三種亞基進(jìn)行提純和電泳,結(jié)果如圖3。請依據(jù)此結(jié)果提出SCID患者免疫缺陷產(chǎn)生的機(jī)制:
IKKB基因突變導(dǎo)致IKKβ含量減少,IKK激酶活力降低,T細(xì)胞減少
IKKB基因突變導(dǎo)致IKKβ含量減少,IKK激酶活力降低,T細(xì)胞減少
。

【答案】Taq酶(耐高溫DNA聚合酶)、4種脫氧核苷酸;引物A和引物C;引物B;②;利用限制酶(SacⅠ、HindⅢ)分別處理突變基因和載體;利用顯微注射法將重組載體注入小鼠受精卵;基因分離;IKKB基因突變導(dǎo)致IKKβ含量減少,IKK激酶活力降低,T細(xì)胞減少
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:17引用:2難度:0.7
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    發(fā)布:2024/12/20 5:0:2組卷:35引用:5難度:0.6
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    (1)獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有
     
    (答出2項(xiàng))等。
    (2)為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒,應(yīng)該選擇
     
    (填酶)切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入
     
    (填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”)對目的基因進(jìn)行篩選。
    (3)培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程
     
    (填序號)。過程②③采用的方法是
     
    。
    (4)⑤過程需要用到
     
    等植物激素,在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過程中,這兩種植物激素的比例會發(fā)生變化,原因是
     
    。

    發(fā)布:2024/12/20 2:30:1組卷:16引用:5難度:0.5
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    限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ
    識別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG
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    發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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