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PHB2蛋白具有抑制細(xì)胞增殖的作用。為初步探究某動(dòng)物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增殖的原因,研究者從基因數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取了該蛋白的基因編碼序列(簡(jiǎn)稱phb2基因),大小為0.9kb(1kb=1000堿基對(duì)),利用大腸桿菌表達(dá)該蛋白?;卮鹣铝袉?wèn)題:
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名稱 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) 名稱 識(shí)別序列及切割位點(diǎn)
HindⅢ A↓AGCTT
TTCGA↑A
EcoRⅠ G↓AATTC
CTTAA↑G
PstⅡ CAG↓CTG
GTC↑GAC
PstⅠ CTGC↓AG
GA↑CGTC
KpnⅠ G↓GTACC
CCATG↑G
BamHⅠ G↓GATCC
CCTAG↑G
注:箭頭表示切割位點(diǎn)
(1)為獲取phb2基因,提取該動(dòng)物肝臟組織的總RNA,再經(jīng)
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
過(guò)程得到cDNA,將其作為PCR反應(yīng)的模板,并設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物來(lái)擴(kuò)增目的基因。
(2)圖1為所用載體圖譜示意圖,圖中限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)見(jiàn)表。為使phb2基因(該基因序列不含圖1中限制酶的識(shí)別序列)與載體正確連接,在擴(kuò)增的phb2基因兩端分別引入
EcoRⅠ
EcoRⅠ
PstⅡ
PstⅡ
兩種不同限制酶的識(shí)別序列,為此需要將兩種酶的識(shí)別序列分別設(shè)計(jì)在兩種引物的
5’
5’
端(填5'或3')。經(jīng)過(guò)這兩種酶酶切的phb2基因和載體進(jìn)行連接時(shí),可選用
T4
T4
(填“E.coli”或“T4”)DNA連接酶。
(3)轉(zhuǎn)化前需用
Ca2+或CaCl2
Ca2+或CaCl2
處理大腸桿菌細(xì)胞,使其處于一種能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),以提高轉(zhuǎn)化效率。
(4)將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),隨機(jī)挑取單菌落(分別編號(hào)為1、2、3、4)培養(yǎng)并提取質(zhì)粒,用(2)中選用的兩種限制酶進(jìn)行酶切,酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分離,結(jié)果如圖2,
3
3
號(hào)菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。

【答案】逆轉(zhuǎn)錄;EcoRⅠ;PstⅡ;5’;T4;Ca2+或CaCl2;3
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書(shū)面同意,不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:11引用:1難度:0.6
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    發(fā)布:2024/12/20 5:0:2組卷:35引用:5難度:0.6
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    (1)獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過(guò)程中應(yīng)用的生物技術(shù)有
     
    (答出2項(xiàng))等。
    (2)為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒,應(yīng)該選擇
     
    (填酶)切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入
     
    (填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”)對(duì)目的基因進(jìn)行篩選。
    (3)培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過(guò)程
     
    (填序號(hào))。過(guò)程②③采用的方法是
     
    。
    (4)⑤過(guò)程需要用到
     
    等植物激素,在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過(guò)程中,這兩種植物激素的比例會(huì)發(fā)生變化,原因是
     
    。

    發(fā)布:2024/12/20 2:30:1組卷:16引用:5難度:0.5
  • 3.如表為5種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn),如圖為某種質(zhì)粒和目的基因,箭頭所指為限制酶酶切位點(diǎn)。現(xiàn)要將圖中的目的基因定向插入到質(zhì)粒中,以制備轉(zhuǎn)基因植株。下列說(shuō)法正確的是(  )
    限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ
    識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG
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    發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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