24．獼猴桃風(fēng)味獨(dú)特，營(yíng)養(yǎng)豐富，Vc含量高，是20世紀(jì)由野生到商業(yè)栽培最成功的馴化植物之一?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）獼猴桃雌雄異株，個(gè)體基因型高度雜合，可通過(guò)種內(nèi)
育種使雙親基因重組，產(chǎn)生高度變異的新品種獼猴桃。在進(jìn)行人工栽培品種與野生毛花獼猴桃遠(yuǎn)緣種間雜交時(shí)發(fā)現(xiàn)近九成種子胚發(fā)育中止，這可能是因?yàn)樗鼈冎g存在
。若要使該胚繼續(xù)發(fā)育獲得植株，可采用的方法是
。
利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將抗蟲基因?qū)氆J猴桃愈傷組織，培育出抗蟲獼猴桃新品種。
（2）若要獲得已知序列的抗蟲基因，可采用
或PCR擴(kuò)增的方法。為確?？瓜x基因正確連接到農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上并保持結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)需選用2種限制酶，一般選擇的原則有
（多選）。
A．抗蟲基因內(nèi)每種限制酶只有一個(gè)切割位點(diǎn)
B．受體農(nóng)桿菌細(xì)胞中不含有該種限制酶
C．酶切后，Ti質(zhì)粒形成的兩個(gè)末端序列不相同
D．為利于切割，限制酶識(shí)別的堿基序列長(zhǎng)度越短越好
（3）將含有重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌與獼猴桃愈傷組織混合培養(yǎng)，使
整合到獼猴桃基因組中，完成轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。篩選出的愈傷組織經(jīng)過(guò)
形成胚狀體，可進(jìn)一步發(fā)育形成轉(zhuǎn)基因植株。
利用品質(zhì)優(yōu)良的獼猴桃與抗寒性極強(qiáng)的軟棗獼猴桃進(jìn)行體細(xì)胞雜交，得到適應(yīng)低溫地區(qū)栽種的優(yōu)良新品種，其部分過(guò)程如下：
（4）原生質(zhì)體的游離與純化：將外植體
，加入含有甘露醇溶液的
酶溶液中處理，一段時(shí)間后過(guò)濾取濾液。將濾液低速離心，吸除上層的細(xì)胞碎片及
，將沉淀物反復(fù)懸浮、離心，得到提純的原生質(zhì)體。為防止原生質(zhì)體
而影響融合效果，應(yīng)盡快誘導(dǎo)兩個(gè)獼猴桃品種的原生質(zhì)體融合。
（5）原生質(zhì)體融合：為增加異源融合的機(jī)會(huì)，將提取純化的兩種原生質(zhì)體
混合，通過(guò)添加適宜濃度的化學(xué)誘導(dǎo)劑
促進(jìn)融合，篩選出雜交細(xì)胞后進(jìn)一步培養(yǎng)可得到體細(xì)胞雜交植株。
