24.為擴(kuò)大可耕地面積,增加糧食產(chǎn)量,沿海灘涂鹽堿地的開發(fā)利用備受關(guān)注??茖W(xué)家應(yīng)用耐鹽堿基因培育出了耐鹽堿水稻新品系,為解決我國糧食問題做出了重要貢獻(xiàn)。若測得某耐鹽基因(RST1)編碼鏈?zhǔn)锥说侥┒耍ㄆ渲幸粭l鏈)的序列為5'-ATCTACGCGCTCATCCG...(省略3n個核苷酸序列)…CGCAGCAATGAGTAGCG-3'。如圖1為構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程示意圖,BamHⅠ、BclⅠ、SmaⅠ、Sau3AⅠ為限制酶(四種酶的識別序列詳見表)。請回答下列問題:
限制酶 |
BamHⅠ |
BclⅠ |
SmaⅠ |
Sau3AⅠ |
識別序列及切割位點(diǎn)(5′→3′) |
G↓GATCC |
T↓GATCA |
CCC↓GGG |
↓GATC |
(1)為獲取更多RST1基因,可通過PCR擴(kuò)增,在反應(yīng)體系中加入引物的作用是
。某同學(xué)設(shè)計了如下六種PCR引物,其中可選用的引物是
(選填序號)。
①5'-GACTACTCGCGCATCTA-3'
②5'-ATCTACGCGCTCATCCG-3'
③5'-GCGATGAGTAACGACGC-3'
④5'-CGCTACTCATTGCTGCG-3'
⑤5'-TAGATGCGCGAGTAGGC-3'
⑥5'-CGCAGCAATGAGTAGCG-3'
(2)若PCR反應(yīng)未得到任何擴(kuò)增產(chǎn)物,主要原因有
(選填序號)。
①退火溫度過高 ②Taq酶失活 ③設(shè)計的引物過短 ④變性溫度過低 ⑤模板受到污染 ⑥Mg
2+濃度過低
(3)為將圖中質(zhì)粒A和RST1基因正確連接構(gòu)建重組質(zhì)粒B,設(shè)計RST1基因的引物時,在兩種引物的5'端分別添加
酶的識別序列,選用
酶切割質(zhì)粒A,酶切后的載體和目的基因片段通過
酶作用后獲得重組質(zhì)粒。為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞,應(yīng)首先在篩選平板培養(yǎng)基添加
,再將平板上長出的菌落通過影印接種法(蓋章)接種到添加
的平板培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)觀察。
(4)從平板上長出的菌落若提取重組質(zhì)粒B利用Sau3AI進(jìn)行酶切,最多可以得到
種大小不同的DNA片段。
(5)圖2是對重組質(zhì)粒測序的部分序列,若目的基因與質(zhì)粒正確連接(啟動子順時針轉(zhuǎn)錄),則圖中連接處的序列正確的是
(填序列編號)。