10.目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細(xì)菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒,pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體,其主要結(jié)構(gòu)如圖所示。
(1)構(gòu)建人工質(zhì)粒時(shí)要有抗性基因,以便于
。
(2)pBR322分子中有單個(gè)EcoRⅠ限制酶作用位點(diǎn),EcoRⅠ只能識(shí)別序列—GAATTC—,并只能在G和A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)EcoRⅠ的切點(diǎn),請(qǐng)畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端:
。
(3)pBR322分子中另有單個(gè)的BamHⅠ限制酶作用位點(diǎn),現(xiàn)將經(jīng)BamHⅠ處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因,通過DNA連接酶作用恢復(fù)
鍵,成功獲得了重組質(zhì)粒的原因是
。
(4)為了檢測(cè)上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無(wú)Amp
r和Tet
r的大腸桿菌,將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng),得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上,使絨布面沾上菌落,然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng),得到如圖三的結(jié)果(空圈表示與圖二對(duì)照無(wú)菌落的位置)。與圖三空圈相對(duì)應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是
,圖三結(jié)果顯示,多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是
。