目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)如圖所示。
（1）構(gòu)建人工質(zhì)粒時要有抗性基因，以便于 篩選（鑒別）目的基因是否導(dǎo)入受體細胞篩選（鑒別）目的基因是否導(dǎo)入受體細胞。
（2）pBR322分子中有單個EcoRⅠ限制酶作用位點，EcoRⅠ只能識別序列—GAATTC—，并只能在G和A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個EcoRⅠ的切點，請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端：
。
（3）pBR322分子中另有單個的BamHⅠ限制酶作用位點，現(xiàn)將經(jīng)BamHⅠ處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復(fù) 磷酸二酯磷酸二酯鍵，成功獲得了重組質(zhì)粒的原因是 兩種限制酶（BamHⅠ和BglⅡ）切割得到的黏性末端相同兩種限制酶（BamHⅠ和BglⅡ）切割得到的黏性末端相同。
（4）為了檢測上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無Ampr和Tetr的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果（空圈表示與圖二對照無菌落的位置）。與圖三空圈相對應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是 能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素，圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是 pBR322質(zhì)粒pBR322質(zhì)粒。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】篩選（鑒別）目的基因是否導(dǎo)入受體細胞；；磷酸二酯；兩種限制酶（BamHⅠ和BglⅡ）切割得到的黏性末端相同；能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素；pBR322質(zhì)粒
；磷酸二酯；兩種限制酶（BamHⅠ和BglⅡ）切割得到的黏性末端相同；能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素；pBR322質(zhì)粒【解答】
【點評】
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