23．養(yǎng)殖家禽的飼料中富含谷物，纖維素是谷物的重要成分，但家禽消化道中缺少能降解纖維素的酶，阻礙了家禽對(duì)飼料的吸收與利用。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改造乳酸桿菌，將其添加于飼料中，以提高家禽養(yǎng)殖效率。請(qǐng)分析并回答下列問(wèn)題。
（1）乳酸桿菌是動(dòng)物胃腸道的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌之一。家禽腸道內(nèi)的乳酸桿菌可利用葡萄糖通過(guò)細(xì)胞呼吸產(chǎn)生酸性物質(zhì)，抑制有害細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖，維持腸道的正常功能，乳酸桿菌與家禽的種間關(guān)系屬于
。
（2）培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)培養(yǎng)基中除添加主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還需要添加
以滿足其生長(zhǎng)對(duì)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求。農(nóng)牧業(yè)上常將以制糖工業(yè)的廢液為原料通過(guò)發(fā)酵獲得的
制成微生物飼料提高飼料的品質(zhì)。
（3）枯草芽孢桿菌分泌可降解纖維素的一種酶，這種酶由W基因編碼。為在乳酸桿菌中表達(dá)W基因，需使用圖1中質(zhì)粒為載體。圖2為克隆得到的含W基因的DNA片段，W基因以乙鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈。
①利用PCR技術(shù)擴(kuò)增W基因時(shí)，需要用到
酶。擴(kuò)增完成后，常采用
法來(lái)鑒定PCR的產(chǎn)物。
②很多啟動(dòng)子具有物種特異性，在圖1質(zhì)粒中插入W基因，其上游啟動(dòng)子應(yīng)選擇
（填字母）。
A．枯草芽孢桿菌啟動(dòng)子
B．乳酸桿菌啟動(dòng)子
C．農(nóng)桿菌啟動(dòng)子
③表格是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。
| 限制酶 |
EcoRⅠ |
BamHⅠ |
KpnⅠ |
MfeⅠ |
HindⅢ |
| 識(shí)別位點(diǎn) |
5′-G↓AATTC-3′
3′-CTTAA↑G-5′ |
5′-G↓GATCC-3′
3′-CCTAG↑G-5′ |
5′-G↓GTACC-3′
3′-CCATG↑G-5′ |
5′-C↓AATTC-3′
3′-GTTAA↑C-5′ |
5′-A↓AGCTT-3′
3′-TTCGA↑A-5′ |
根據(jù)上述信息，應(yīng)使用限制酶
切割圖1中質(zhì)粒，使用限制酶
切割圖2中含W基因的DNA片段，以獲得能正確表達(dá)W基因的重組質(zhì)粒。
④所得重組質(zhì)粒導(dǎo)入到乳酸桿菌后，使用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選，以得到成功導(dǎo)入W基因的乳酸桿菌。
（4）為確定導(dǎo)入重組質(zhì)粒的乳酸桿菌是否具有分解纖維素的能力，研究人員將導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的乳酸桿菌接種在
固體鑒別培養(yǎng)基上，若出現(xiàn)
現(xiàn)象，則證明導(dǎo)入成功。
