21.圖1表示含有目的基因D的DNA片段長(zhǎng)度(bp即堿基對(duì))和部分堿基序列,圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列?,F(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內(nèi)切酶切割的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:
(1)若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段,其產(chǎn)物長(zhǎng)度為
。
(2)若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T-A堿基對(duì)替換,那么基因D就突變?yōu)榛騞。從隱性純合子分離出圖1及其對(duì)應(yīng)的DNA片段,用限制酶SmaⅠ完全切割,產(chǎn)物中共有
種不同DNA片段。為了提高實(shí)驗(yàn)成功率,需要通過(guò)
技術(shù)擴(kuò)增目的基因,以獲得目的基因的大量拷貝,該技術(shù)原理為
。
(3)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過(guò)同種限制酶處理后進(jìn)行,形成重組質(zhì)粒,那么應(yīng)選用的限制酶是
。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后,為了篩選出含質(zhì)粒的大腸桿菌,一般需要用添加
的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),想進(jìn)一步篩選出含重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞,還需要接種到含
的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
(4)假設(shè)用BamHⅠ切割DNA獲取目的基因,用MboⅠ切割質(zhì)粒,然后形成重組質(zhì)粒,若將插入在抗生素B抗性基因處的目的基因重新切割下來(lái),能否再次用BamHⅠ
(填:可以、不可以、不一定),原因是:
。