25.如圖所示為A、B、C三種質(zhì)粒和一個含目的基因D的DNA片段示意圖。圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因,Tc為四環(huán)素抗性基因,lacZ為藍色顯色基因,其表達產(chǎn)物可以將無色化合物X-gal轉(zhuǎn)化成藍色物質(zhì),使大腸桿菌的菌落呈藍色,否則菌落為白色。EcoRⅠ、PvuⅠ為兩種限制酶,質(zhì)粒上限制酶括號內(nèi)的數(shù)字表示限制酶切割位點與復(fù)制原點的距離。請回答:
(1)利用PCR技術(shù)對一個目的基因擴增n次,需要
對引物,熱穩(wěn)定DNA聚合酶能從引物的
端開始連接脫氧核苷酸,從而獲得大量目的基因D。
(2)據(jù)圖分析,質(zhì)粒A、C不能作為目的基因D的載體,理由分別是
。將目的基因D與質(zhì)粒B進行重組,應(yīng)該選用的酶有
。
(3)在基因工程的操作過程中,需要檢查目的基因D是否重組到質(zhì)粒中,使用EcoRI處理重組質(zhì)粒,完全酶切后,進行電泳檢測。若電泳圖譜中出現(xiàn)長度為1.6kb和3.1kb,或者
kb和
kb的片段,則可判斷質(zhì)粒B已與目的基因D重組成功。
(4)利用自身不含lacZ基因且對抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細胞,要在已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒、已轉(zhuǎn)化的含空質(zhì)粒的受體細胞和未轉(zhuǎn)化成功的細胞中,篩選出已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒的受體細胞的方法是:在含有
的培養(yǎng)基上培養(yǎng),形成
色菌落的為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細胞。
(5)下列關(guān)于基因工程常用運載體——質(zhì)粒的說法正確的是
。
A.使用質(zhì)粒作為運載體可避免目的基因被分解
B.質(zhì)粒只有與目的基因重組后才能進入細胞
C.質(zhì)粒上具有1個至多個限制酶切點,以便于切割后與目的基因連接
D.質(zhì)粒的復(fù)制和表達也遵循中心法則