12.圖1為T(mén)i質(zhì)粒酶切圖譜。圖2為含Bt基因(殺蟲(chóng)毒蛋白基因)的外源DNA片段的限制酶酶切圖譜。圖3表示相關(guān)限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)?,F(xiàn)欲通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)棉?;卮鹣铝袉?wèn)題:
(1)除四環(huán)素抗性基因和Bt基因外,作為表達(dá)載體,該質(zhì)粒至少還應(yīng)該具有
等調(diào)控元件;PstⅠ等的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)應(yīng)位于
片段內(nèi),以確保Bt基因隨Ti質(zhì)粒進(jìn)入棉花細(xì)胞后能插入到棉花細(xì)胞中的染色體DNA上。
(2)為保證Bt基因與Ti質(zhì)粒的正常連接,應(yīng)選用
酶和MseⅠ酶切割外源DNA,并將Ti質(zhì)粒上的序列“GAATTC”改造為
。
(3)轉(zhuǎn)Bt基因的棉花細(xì)胞經(jīng)過(guò)
過(guò)程可以培育成轉(zhuǎn)基因棉花幼苗;利用抗原—抗體反應(yīng)等原理,可以檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉幼葉中的Bt毒蛋白及其含量,以此來(lái)檢測(cè)
。
(4)我國(guó)發(fā)放了6種轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)口安全證書(shū),但進(jìn)口的基本上是轉(zhuǎn)基因棉花的纖維而不是轉(zhuǎn)基因玉米等糧食產(chǎn)品,從轉(zhuǎn)基因技術(shù)安全性的角度分析,原因是
。