25.α-抗胰蛋白酶是一種主要由肝細胞合成的血漿蛋白,具有維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的功能??蒲腥藛T利用乳腺生物反應(yīng)器獲得了α-抗胰蛋白酶?;卮鹣铝袉栴}:
(1)將人正常干細胞系L-02培養(yǎng)在某動物細胞培養(yǎng)基中,在37℃、5%CO
2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。CO
2的主要作用是
。待細胞培養(yǎng)至對數(shù)生長末期,用
酶消化,進行細胞計數(shù)和離心收集,提取RNA,經(jīng)
(填過程)最終獲得α-抗胰蛋白酶基因。
(2)利用PCR技術(shù)擴增α-抗胰蛋白酶基因時,科研人員在兩個引物的
(填“5'端”或“3'端”)各添加一種限制酶的酶切位點,在該端添加的理由是
。α-抗胰蛋白酶基因兩端添加不同的限制酶切割位點的目的是
。
(3)將α-抗胰蛋白酶基因與牛乳腺中
的啟動子等調(diào)控組件重組在一起,構(gòu)建成基因表達載體。若將α-抗胰蛋白酶基因直接導入牛受精卵中,往往不能獲得所需的轉(zhuǎn)基因牛,理由是
。
(4)將含基因表達載體的受精卵置于早期胚胎培養(yǎng)液中進行培養(yǎng),早期胚胎進行移植前,需進行性別鑒定。性別鑒定的操作思路是
。
(5)轉(zhuǎn)基因牛成年后需對其α-抗胰蛋白酶基因的表達產(chǎn)物進行檢測,一般采用
法。