α-抗胰蛋白酶是一種主要由肝細(xì)胞合成的血漿蛋白，具有維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的功能?？蒲腥藛T利用乳腺生物反應(yīng)器獲得了α-抗胰蛋白酶?；卮鹣铝袉栴}：
（1）將人正常干細(xì)胞系L-02培養(yǎng)在某動物細(xì)胞培養(yǎng)基中，在37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。CO2的主要作用是 維持培養(yǎng)液的pH值維持培養(yǎng)液的pH值。待細(xì)胞培養(yǎng)至對數(shù)生長末期，用 胰蛋白胰蛋白酶消化，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和離心收集，提取RNA，經(jīng) 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄（填過程）最終獲得α-抗胰蛋白酶基因。
（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增α-抗胰蛋白酶基因時(shí)，科研人員在兩個(gè)引物的 5'端5'端（填“5'端”或“3'端”）各添加一種限制酶的酶切位點(diǎn)，在該端添加的理由是 DNA復(fù)制方向是由5'端到3'端DNA復(fù)制方向是由5'端到3'端。α-抗胰蛋白酶基因兩端添加不同的限制酶切割位點(diǎn)的目的是 防止自身連接環(huán)化防止自身連接環(huán)化。
（3）將α-抗胰蛋白酶基因與牛乳腺中 乳蛋白乳蛋白的啟動子等調(diào)控組件重組在一起，構(gòu)建成基因表達(dá)載體。若將α-抗胰蛋白酶基因直接導(dǎo)入牛受精卵中，往往不能獲得所需的轉(zhuǎn)基因牛，理由是 直接將其導(dǎo)入受體細(xì)胞，很可能會被降解或不能表達(dá)直接將其導(dǎo)入受體細(xì)胞，很可能會被降解或不能表達(dá)。
（4）將含基因表達(dá)載體的受精卵置于早期胚胎培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，早期胚胎進(jìn)行移植前，需進(jìn)行性別鑒定。性別鑒定的操作思路是 取囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞做DNA分析性別鑒定取囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞做DNA分析性別鑒定。
（5）轉(zhuǎn)基因牛成年后需對其α-抗胰蛋白酶基因的表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測，一般采用 抗原—抗體雜交抗原—抗體雜交法。
【答案】維持培養(yǎng)液的pH值；胰蛋白；逆轉(zhuǎn)錄；5'端；DNA復(fù)制方向是由5'端到3'端；防止自身連接環(huán)化；乳蛋白；直接將其導(dǎo)入受體細(xì)胞，很可能會被降解或不能表達(dá)；取囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞做DNA分析性別鑒定；抗原—抗體雜交
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：1引用：2難度：0.6
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1．動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)是細(xì)胞工程的基本技術(shù)，下列關(guān)于這兩項(xiàng)技術(shù)的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：29引用：2難度：0.7 -
2．回答與基因工程、動物克隆和胚胎工程有關(guān)的問題：
（1）幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。在進(jìn)行基因工程操作時(shí)，可以從植物體中提取幾丁質(zhì)酶的mRNA，以mRNA為材料可以獲得cDNA，其原理是。若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。
（2）為了提高動物成纖維細(xì)胞克隆形成率，可以選擇適宜的培養(yǎng)基、添加牛血清、以支持生長等措施。當(dāng)?shù)谝粋€(gè)卡氏瓶中的細(xì)胞濃度不再增加時(shí)，若要細(xì)胞繼續(xù)增殖，可采用的方法是。細(xì)胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)箱中通常要維持一定的CO2濃度，CO2的作用是。
（3）下列關(guān)于胚胎工程的敘述，錯(cuò)誤的是
A．在動物的飼料中添加一定量的促性腺激素促使超數(shù)排卵
B．若在囊胚期進(jìn)行胚胎分割，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，滋養(yǎng)成則不必
C．可以從雌性動物體內(nèi)卵泡處吸取卵泡液，取出卵母細(xì)胞進(jìn)一步培養(yǎng)成熟
D．胚胎成纖維細(xì)胞可以用于胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)，因?yàn)槠淠芊置谝种萍?xì)胞分化的物質(zhì)。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：3引用：1難度：0.7 -
3．據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟最新數(shù)據(jù)，2021年全球約5.37億成人患有糖尿病，670萬成人因糖尿病或其并發(fā)癥死亡。如圖是研究人員提出的治療方案，請回答下列問題：
（1）從患者體內(nèi)獲得體細(xì)胞后，對其進(jìn)行的初次培養(yǎng)稱為，培養(yǎng)的細(xì)胞在貼壁生長至鋪滿培養(yǎng)皿底時(shí)停止分裂，這種現(xiàn)象稱為。一般來說，動物細(xì)胞培養(yǎng)需要的條件有（少答出兩點(diǎn)）。
（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增正常胰島素基因的前提條件是。目前臨床用的胰島素生效較慢，科學(xué)家將胰島素β鏈的第28和29個(gè)氨基酸調(diào)換順序，成功獲得了速效胰島素。生產(chǎn)速效胰島素，需要對進(jìn)行定向改造。
A.胰島素
B.胰島素mRNA
C.胰島素基因
D.胰島
（3）欲檢測胰島類似細(xì)胞是否具有胰島B細(xì)胞的正常生理功能，可設(shè)計(jì)如下實(shí)驗(yàn)：將等量的胰島類似細(xì)胞與正常胰島B細(xì)胞分別加入兩組相等濃度的培養(yǎng)液中，適宜且相同條件下進(jìn)行培養(yǎng)，一段時(shí)間后分別檢測兩組培養(yǎng)液中。
（4）該治療糖尿病的方法與異體移植相比，突出的優(yōu)點(diǎn)是。發(fā)布：2024/12/31 2:30:2組卷：35引用：2難度：0.6
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