23.某學(xué)校研究小組準(zhǔn)備克隆含有SLA-2基因的質(zhì)粒,首先構(gòu)建該基因的表達(dá)載體,然后通過大腸桿菌進行克隆重組質(zhì)粒,過程如圖1所示,下表為不同限制酶的識別序列及切割位點。請回答下列問題:
限制酶 |
BclⅠ |
NotⅠ |
XbaⅠ |
Sau3AⅠ |
識別序列及切割位點 |
T↓GATCA |
GC↓GGCCGC |
T↓CTAGA |
↓GATC |
??
(1)圖1過程①中,PCR擴增SLA-2基因需要的酶是
需要
種引物參與。
(2)在進行圖1的②過程之前,需切割目的基因和質(zhì)粒,選用的限制酶是
,③過程初步篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌,應(yīng)在含
(抗生素)的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
(3)在培養(yǎng)大腸桿菌前,檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格的操作是
。用稀釋涂布平板法統(tǒng)計細(xì)菌數(shù)目時,統(tǒng)計的菌落數(shù)往往
(填“多于”或“少于”)稀釋液中的活菌數(shù),原因是
。若其中一個平板的菌落分布如圖2,推測該同學(xué)接種時可能的操作失誤是
。