23.番茄在低溫下運輸、儲存的過程中,容易出現(xiàn)凍傷,影響番茄的品質(zhì)??茖W家利用基因工程技術(shù)將AFPs抗凍基因轉(zhuǎn)入番茄植株,培育抗凍番茄。如圖1表示構(gòu)建重組質(zhì)粒時所用載體,三種限制酶及酶切位點分別為:①BamHⅠ-G,GATCC-②Bgl∥-A,GATCT-③EcoRⅠ-G,AATTC-,請回答下列問題:
(1)構(gòu)建重組質(zhì)粒時一般需要選用兩種不同的限制酶切割,目的是
。用限制酶切割質(zhì)粒后,可以使用
酶催化DNA片段上的磷酸二酯鍵的形成。
(2)在重組質(zhì)粒中,目的基因首端的啟動子能夠與
結(jié)合,驅(qū)動目的基因的轉(zhuǎn)錄。本實驗應選用
作為標記基因。
(3)若目的基因用BamHI和BglⅡ剪切,質(zhì)粒用BamHI剪切,剪切后的目的基因和質(zhì)粒能連接在一起,原因是
酶切后的目的基因存在正向與反向兩種連接方式,可用
酶對兩種重組質(zhì)粒進行剪切,通過凝膠電泳分析產(chǎn)物大小進行區(qū)分(如圖2所示),圖中
(填“樣品1”或“樣品2”)為所需基因表達載體。