番茄在低溫下運輸、儲存的過程中，容易出現(xiàn)凍傷，影響番茄的品質(zhì)?？茖W家利用基因工程技術將AFPs抗凍基因轉入番茄植株，培育抗凍番茄。如圖1表示構建重組質(zhì)粒時所用載體，三種限制酶及酶切位點分別為：①BamHⅠ-G，GATCC-②Bgl∥-A，GATCT-③EcoRⅠ-G，AATTC-，請回答下列問題：
（1）構建重組質(zhì)粒時一般需要選用兩種不同的限制酶切割，目的是 防止載體、目的基因自身環(huán)化及目的基因反向連接防止載體、目的基因自身環(huán)化及目的基因反向連接。用限制酶切割質(zhì)粒后，可以使用 DNA連接DNA連接酶催化DNA片段上的磷酸二酯鍵的形成。
（2）在重組質(zhì)粒中，目的基因首端的啟動子能夠與 RNA聚合酶RNA聚合酶結合，驅(qū)動目的基因的轉錄。本實驗應選用 四環(huán)素抗性基因四環(huán)素抗性基因作為標記基因。
（3）若目的基因用BamHI和BglⅡ剪切，質(zhì)粒用BamHI剪切，剪切后的目的基因和質(zhì)粒能連接在一起，原因是 BamHI和BglII切割得到的黏性末端相同BamHI和BglII切割得到的黏性末端相同酶切后的目的基因存在正向與反向兩種連接方式，可用 EcoRI和BamHIEcoRI和BamHI酶對兩種重組質(zhì)粒進行剪切，通過凝膠電泳分析產(chǎn)物大小進行區(qū)分（如圖2所示），圖中 樣品2樣品2（填“樣品1”或“樣品2”）為所需基因表達載體。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】防止載體、目的基因自身環(huán)化及目的基因反向連接；DNA連接；RNA聚合酶；四環(huán)素抗性基因；BamHI和BglII切割得到的黏性末端相同；EcoRI和BamHI；樣品2
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/5/22 8:0:8組卷：12引用：1難度：0.7
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質(zhì)工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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