葉綠體DNA（cpDNA）大多為環(huán)狀雙鏈，其基因組序列高度保守，目前已在分子標記、核質(zhì)互作、葉綠體基因工程等方面開展了廣泛研究。下列為提取cpDNA的相關步驟，其中SDS能瓦解生物膜，苯酚使蛋白質(zhì)變性析出，氯仿與苯酚互溶，易于除去苯酚。
（1）葉綠體的分離
①勻漿使細胞破碎：將葉片于4℃冰箱黑暗饑餓處理12～24h后，剪成1cm長度，放入勻漿機，倒入緩沖液，先低速勻漿2次，再高速勻漿3次，每次5～10s.勻漿前黑暗饑餓處理的目的是

使葉綠體中的淀粉消耗掉

使葉綠體中的淀粉消耗掉

，有利于cpDNA的提取。
②離心得到葉綠體粗提物：將勻漿液過濾后離心，棄沉淀以去除細胞殘?。粚⒌玫降纳锨逡涸俅坞x心，棄上清，即得葉綠體粗提物，第二次離心的速度比第一次

高

高

。整個過程中線粒體分布在

上清液

上清液

中，從而避免了線粒體DNA對cpDNA的污染。
（2）去除核DNA：向葉綠體粗提物中加入

DNA酶

DNA酶

、緩沖液，37℃靜置15min后，離心取沉淀，從而去除吸附在葉綠體外膜上的核DNA．
（3）葉綠體的裂解和cpDNA的粗提：將純化的葉綠體加入緩沖液、SDS、蛋白酶K，55℃水浴3h,使葉綠體裂解，釋放出cpDNA，離心取上清液。在上清液中加入苯酚和氯仿，離心后的液體包括上層水相、中層變性蛋白和下層有機溶劑，cpDNA分布于

上層水相

上層水相

中，小心用移液槍吸取該層液體。
（4）沉淀cpDNA：向粗提溶液中加入3mol?L^-1醋酸鈉及預冷的

95%酒精

95%酒精

，離心取沉淀物。
（5）電泳檢測cpDNA：圖1、2是某品種茶樹用上述方法提取到的cpDNA凝膠電泳結果，其中M是已知大小的不同DNA的混合物。2組無條帶，表明提取不成功，其可能的原因之一是操作過程中葉綠體裂解時間過長，導致

cpDNA片段斷裂或降解，所提取的cpDNA含量少

cpDNA片段斷裂或降解，所提取的cpDNA含量少

。
（6）葉綠體基因的遺傳方式

不遵循

不遵循

（填“遵循”或“不遵循”）孟德爾遺傳定律，不會隨

花粉

花粉

傳給后代，從而保持了母本的遺傳特性，并且避免轉基因植物對其近緣植物的基因污染。