從自然界中的生物體內(nèi)分離得到的天然酶，在工業(yè)生產(chǎn)環(huán)境中催化效率往往較低?？蒲腥藛T對酶的改造包括理性設(shè)計(jì)方法和非理性設(shè)計(jì)方法。
（1）理性設(shè)計(jì)是通過定點(diǎn)誘變改變蛋白質(zhì)中的個別氨基酸，以產(chǎn)生更加理想的酶，此項(xiàng)技術(shù)稱為

蛋白質(zhì)工程

蛋白質(zhì)工程

。
（2）非理性設(shè)計(jì)方法主要通過易錯PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)。易錯PCR的原理是利用低保真的TaqDNA聚合酶和改變PCR的反應(yīng)條件，降低DNA復(fù)制的保真度，在新DNA鏈的合成過程中增加堿基錯配，從而使擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)較多點(diǎn)突變的一種體外誘導(dǎo)DNA序列變異的方法。
①TaqDNA聚合酶與一般DNA聚合酶相比最大的特點(diǎn)是 

高溫下能保持活性或耐高溫

高溫下能保持活性或耐高溫

，其某一區(qū)域負(fù)責(zé)將堿基與模板鏈正確地互補(bǔ)配對，Mn²⁺可以降低這一功能，提高堿基的錯配，但非互補(bǔ)的堿基對由于

氫鍵

氫鍵

不易形成，穩(wěn)定性差，而Mg²⁺可以提高穩(wěn)定性，易錯PCR時應(yīng)適當(dāng)

提高

提高

（填“提高”或“降低”）Mg²⁺濃度。
②易錯PCR的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃5min；95℃30s,55℃30s,72℃1min,30個循環(huán)；72℃10min。在循環(huán)之前的95℃5min處理為預(yù)變性，目的是確保

DNA分子充分（完全、徹底）變性

DNA分子充分（完全、徹底）變性

；循環(huán)中55℃處理的目的是使

引物與模板

引物與模板

結(jié)合；循環(huán)之后72℃處理時間延長至10min,有利于增加延伸過程中堿基錯配的概率。
③如圖是利用易錯PCR改造某種天然酶活性的流程示意圖。構(gòu)建重組質(zhì)粒所需要的酶是

限制酶（限制性內(nèi)切核酸酶）和DNA連接酶

限制酶（限制性內(nèi)切核酸酶）和DNA連接酶

。

④步驟b應(yīng)使用

Cacl₂（或Ca²⁺）

Cacl₂（或Ca²⁺）

（化學(xué)試劑）使受體菌處于

感受

感受

態(tài)；步驟c采用

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

技術(shù)篩選突變酶；步驟d將一輪易錯PCR篩選獲得的有益突變繼續(xù)進(jìn)行新一輪的易錯PCR，通過連續(xù)易錯PCR和篩選，導(dǎo)致酶的

定向

定向

進(jìn)化，以獲得滿足人們需求的產(chǎn)物。