如圖為培育轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉的技術(shù)路線(xiàn)示意圖。

回答下列問(wèn)題：
（1）通常用

相同

相同

的限制酶切含抗蟲(chóng)基因的DNA和Ti質(zhì)粒，影響酶切作用時(shí)間的因素除了含目的基因的DNA片段和載體等酶切對(duì)象的濃度外，還有

酶濃度、溫度

酶濃度、溫度

。（答2點(diǎn)即可）
（2）Ti質(zhì)粒的

T-DNA

T-DNA

區(qū)域有生長(zhǎng)素基因和細(xì)胞分裂素基因，農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞后，這兩種基因進(jìn)入植物細(xì)胞并表達(dá)，從而打破植物細(xì)胞的

基因表達(dá)

基因表達(dá)

平衡，干擾植物細(xì)胞的正常分裂、生長(zhǎng)，不能再分化成植株。因此在構(gòu)建重組質(zhì)粒前需將這兩種基因從克隆載體中

敲除

敲除

。
（3）在農(nóng)桿菌與植物細(xì)胞共培養(yǎng)完成

轉(zhuǎn)化

轉(zhuǎn)化

后，需先在

B

B

（A．含抗生素B．不含抗生素C．是否含抗生素?zé)o要求）的液體全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)一段時(shí)間，使農(nóng)桿菌恢復(fù)到正常的生理狀態(tài)。并表達(dá)

抗蟲(chóng)基因

抗蟲(chóng)基因

，再轉(zhuǎn)入篩選培養(yǎng)基中進(jìn)行選擇培養(yǎng)，其中確定選擇培養(yǎng)基中所用的抗生素種類(lèi)時(shí)，必須要考慮的因素有

農(nóng)桿菌所攜帶的抗生素抗性基因，抗生素濃度

農(nóng)桿菌所攜帶的抗生素抗性基因，抗生素濃度

。（答2點(diǎn)即可）
（4）棉花葉肉細(xì)胞的全能性表達(dá)能力

小于

小于

胚組織，但培育轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉時(shí)，選擇棉花葉肉細(xì)胞作為受體細(xì)胞，是為了將抗蟲(chóng)基因定點(diǎn)整合進(jìn)

葉綠體

葉綠體

基因組中，以克服細(xì)胞核轉(zhuǎn)化中經(jīng)常出現(xiàn)的外源基因表達(dá)效率低，以及避免造成核基因隨花粉擴(kuò)散而帶來(lái)轉(zhuǎn)基因植物的

基因污染

基因污染

問(wèn)題。