當前位置： 2022-2023學年湖南省邵陽二中高二（下）期中生物試卷> 試題詳情

PCR定點突變技術(shù)是最常用的基因突變技術(shù)，通過定點誘變可以在體外改造DNA分子。重疊延伸PCR是發(fā)展最早的PCR定點突變技術(shù)，操作過程如圖1?？赏ㄟ^測序檢驗定點突變是否成功?，F(xiàn)欲將改造后的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒導入大腸桿菌，質(zhì)粒結(jié)構(gòu)如圖2?；卮鹣铝袉栴}：

（1）圖1所示重疊延伸PCR中，第1對引物是
突變引物FP2和通用引物RP2
突變引物FP2和通用引物RP2
；在第1對引物組成的反應(yīng)系統(tǒng)和第2對引物組成的反應(yīng)系統(tǒng)中各進行一次復制，共產(chǎn)生
3
3
種DNA分子；此過程不能將兩對引物共置于同一反應(yīng)系統(tǒng)中，原因是
突變引物FP2和突變引物RP1可以互補配對，導致引物失效
突變引物FP2和突變引物RP1可以互補配對，導致引物失效
。
（2）圖1所示DNA分子不能延伸，原因是
DNA單鏈延伸的方向必須是5’到3’
DNA單鏈延伸的方向必須是5’到3’
。
（3）分析圖1和圖2，要將突變的基因定向插入質(zhì)粒并構(gòu)建表達載體，應(yīng)如何設(shè)計通用引物FP1和通用引物RP2？
應(yīng)保證突變基因右側(cè)應(yīng)是CTAG
應(yīng)保證突變基因右側(cè)應(yīng)是CTAG
。
（4）為篩選出含有目的基因的大腸桿菌，通常采用影印法（使用無菌的絨氈布壓在培養(yǎng)基A的菌落上，帶出少許菌種，平移并壓在培養(yǎng)基B上，結(jié)果如圖3）。培養(yǎng)基A中應(yīng)添加
氨芐青霉素
氨芐青霉素
，培養(yǎng)基B中應(yīng)添加
四環(huán)素
四環(huán)素
，含有重組質(zhì)粒的菌落是
4、6
4、6
（填寫數(shù)字），原因是
用兩種限制酶對質(zhì)粒進行切割時，會破壞四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生存，但不能在含有四環(huán)素培養(yǎng)基上生存
用兩種限制酶對質(zhì)粒進行切割時，會破壞四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生存，但不能在含有四環(huán)素培養(yǎng)基上生存
。

【答案】突變引物FP2和通用引物RP2；3；突變引物FP2和突變引物RP1可以互補配對，導致引物失效；DNA單鏈延伸的方向必須是5’到3’；應(yīng)保證突變基因右側(cè)應(yīng)是CTAG；氨芐青霉素；四環(huán)素；4、6；用兩種限制酶對質(zhì)粒進行切割時，會破壞四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生存，但不能在含有四環(huán)素培養(yǎng)基上生存

【解答】

【點評】

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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：40引用：2難度：0.5

相似題

1．PCR是利用體內(nèi)DNA復制的原理，進行生物體外復制特定 DNA片段的核酸合成技術(shù)。請回答有關(guān)問題：
（1）PCR反應(yīng)的基本步驟是變性、

、

。
（2）科學家研究發(fā)現(xiàn) DNA聚合酶只能催化

方向的聚合反應(yīng)。圖1表示細胞內(nèi)染色體 DNA的半保留復制過程，有一條子鏈是先合成短的DNA片段（稱為岡崎片段），再形成較長的分子，可推測參與以上過程的酶有DNA聚合酶、

、

。在PCR過程中無岡崎片段形成，原因是細胞內(nèi)染色體 DNA的復制過程特點是

，PCR過程的特點是

。
（3）雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與脫氧核苷三磷酸（dNTP）的結(jié)構(gòu)如圖2所示。已知 ddNTP按堿基互補配對的方式加到正在復制的子鏈中后，子鏈的延伸立即終止。現(xiàn)有一些序列為5'-GCCTAAGATCGCA-3'的DNA分子單鏈片段，通過PCR技術(shù)獲得以堿基“C”為末端（3'為堿基C）不同長度的子鏈DNA片段，將以上子鏈 DNA片段進行電泳分離可得到

種不同長度的子鏈 DNA片段。為使實驗順利進行，在PCR反應(yīng)管中除了單鏈模板、引物、DNA 聚合酶和相應(yīng)的緩沖液等物質(zhì)外，還需要加入下列哪組原料

。
A.dGTP，dATP，dTTP
B.dGTP、dATP、dTTP、dCTP、ddCTP
C.dGTP，dATP，dTTP，dCTP
D.ddGTP，ddATP，ddTTP，ddCTP
（4）如圖3為形成單鏈DNA后，再進行PCR擴增示意圖。

催化①過程的酶是

；核酸酶H的作用是

。如果某RNA單鏈中一共有80個堿基，其中C有15個，A與U之和占該鏈堿基含量的40%，經(jīng)過以上若干過程后共獲得8個雙鏈 DNA，此過程中至少需加入G參與組成的核苷酸數(shù)量為

（以上過程不考慮引物）。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：19引用：1難度：0.7
解析
2．PCR是利用體內(nèi)DNA復制的原理，進行生物體外復制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。請回答有關(guān)問題：

（1）PCR反應(yīng)的基本步驟是變性、復性、

。
（2）雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與脫氧核苷三磷酸（dNTP）的結(jié)構(gòu)如圖2所示。已知ddNTP按堿基互補配對的方式加到正在復制的子鏈中后，子鏈的延伸立即終止?，F(xiàn)主有一些序列為5'-GCCTAAGATCGCA-3'的DNA分子單鏈片段，通過PCR技術(shù)獲得以堿基“C”為末端（3'為堿基C）不同長度的子鏈DNA片段，將以上子鏈DNA片段進行電泳分離可得到

種不同長度的子鏈DNA片段。為使實驗順利進行，在PCR反應(yīng)管中除了單鏈模板、引物、DNA聚合酶和相應(yīng)的緩沖液等物質(zhì)外，還需要加入下列哪組原料

。
A．dGTP、dATP、dTTP
B．dGTR、dATP、dTTP、dCTP、ddCTP
C．dGTP、dATP、dTTP、dCTP
D．ddGTP、ddATP、ddTTP、ddCTP
（3）科學家研究發(fā)現(xiàn)DNA聚合酶只能催化

方向的聚合反應(yīng)。圖1表示細胞內(nèi)染色體DNA的復制過程，有一條子鏈是先合成短的DNA片段（稱為岡崎片段），再形成較長的分子，可推測參與以上過程的酶有DNA連接酶

、

。在PCR過程中無岡崎片段形成，原因是細胞內(nèi)染色體DNA的復制過程特點是

，PCR過程的特點是

。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：12引用：1難度：0.7
解析
3．Sanger法DNA測序技術(shù)的核心原理：由于雙脫氧核苷酸（ddNTP）的2'和3'都不含羥基，其在DNA的合成過程中不能形成磷酸二酯鍵，因此可以中斷DNA分子合成反應(yīng)。在四個含有4種脫氧核苷酸（dNTP）的DNA體外合成反應(yīng)體系中分別加入一定比例帶有放射性同位素標記的ddNTP（分別為：ddATP，ddCTP，ddGTP和ddTTP），在PCR過程中復制隨機終止，產(chǎn)生四組不同長度的一系列終止處帶有標記的DNA片段。然后在變性凝膠（加入尿素等堿性物質(zhì)）上進行電泳和放射自顯影后，可以根據(jù)電泳帶的位置確定待測分子的DNA序列，具體過程見圖。
注：ddA是ddATP的縮寫形式。

（1）如圖1中Ⅰ過程橫線①中應(yīng)該加入的物質(zhì)是

，dNTP中dATP與ATP在組成上的區(qū)別是

，為什么該過程中需要添加引物？
（2）材料中提到“在變性凝膠上進行電泳……”，請解釋“變性”

，為什么要變性處理？

。
（3）如果電泳結(jié)果如圖2所示，請寫出待測DNA分子的序列

。
（4）某同學要通過PCR技術(shù)獲得被³²P標記且以堿基“C”為末端、不同長度的子鏈DNA片段，在反應(yīng)管中已經(jīng)有模板、引物、酶和相應(yīng)緩沖液等等，還需加入哪些原料

。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：16引用：1難度：0.7
解析

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