農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA（序列已知）可以轉(zhuǎn)移并隨機(jī)插入被侵染植物的染色體DNA中。研究者將圖1中被侵染植物的DNA片段連接成環(huán)，并以此環(huán)為模板，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列，進(jìn)一步分析可確定T-DNA插入的具體位置。T-DNA的序列如圖2所示，虛線處省略了部分核苷酸序列。已知SalⅠ酶的識(shí)別序列為5'G↓TCGAC3'。
（1）PCR技術(shù)擴(kuò)增時(shí)起關(guān)鍵作用的酶是 Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶），其作用是 將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端。
（2）擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列時(shí)，需要先根據(jù) T-DNA基因兩端已知的堿基序列T-DNA基因兩端已知的堿基序列設(shè)計(jì)兩種特異性引物序列，利用圖中的引物 ①④①④組合可擴(kuò)增出T-DNA兩側(cè)的未知序列。
（3）若只使用一種引物，通過PCR技術(shù)制備與T-DNA的b鏈相同的單鏈作為某些檢測(cè)的探針，則所選擇引物由5'→3'的前5個(gè)堿基序列為 5′-CTGTC-3′5′-CTGTC-3′。
（4）對(duì)PCR產(chǎn)物測(cè)序，經(jīng)分析得到了圖1中的未知序列。下列DNA單鏈序列中（虛線處省略了部分核苷酸序列），可能正確的是 AA。
A．5'-TCGACCACG_____ATGTCGA-3'
B．5-AATTCCATG_____CTGAATT-3'
C．5'-GCAATGCGT_____TCGGGAA-3'
D．5'-TTGATACGC_____CGAGTAC-3'
（5）PCR技術(shù)擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列后，擴(kuò)增產(chǎn)物可用 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)進(jìn)行鑒定。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）；將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端；T-DNA基因兩端已知的堿基序列；①④；5′-CTGTC-3′；A；瓊脂糖凝膠電泳
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：9引用：1難度：0.5
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1．以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù)，其中說法正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
2．科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因（SLA-2基因），構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體，進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實(shí)驗(yàn)的主要流程如圖1，SLA-2基因長(zhǎng)度為1100bp,質(zhì)粒B的總長(zhǎng)度為4445bp,其限制酶切點(diǎn)后的數(shù)字表示距復(fù)制原點(diǎn)的距離。請(qǐng)回答：
（1）過程①中，PCR擴(kuò)增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應(yīng)選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是，該過程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳，請(qǐng)?jiān)诖痤}紙相應(yīng)位置畫出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對(duì)真核細(xì)胞進(jìn)行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個(gè)濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒有抗性的細(xì)胞死亡又不會(huì)讓。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測(cè)腎上皮細(xì)胞生產(chǎn)的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測(cè)其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：41引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”的實(shí)驗(yàn)，說法錯(cuò)誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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