當(dāng)前位置： 2022-2023學(xué)年山東省青島市地區(qū)高二（下）期中生物試卷> 試題詳情

農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA（序列已知）可以轉(zhuǎn)移并隨機(jī)插入被侵染植物的染色體DNA中。研究者將圖1中被侵染植物的DNA片段連接成環(huán)，并以此環(huán)為模板，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列，進(jìn)一步分析可確定T-DNA插入的具體位置。T-DNA的序列如圖2所示，虛線處省略了部分核苷酸序列。已知SalⅠ酶的識(shí)別序列為5'G↓TCGAC3'。

（1）PCR技術(shù)擴(kuò)增時(shí)起關(guān)鍵作用的酶是
Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）
Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）
，其作用是
將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端
將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端
。
（2）擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列時(shí)，需要先根據(jù)
T-DNA基因兩端已知的堿基序列
T-DNA基因兩端已知的堿基序列
設(shè)計(jì)兩種特異性引物序列，利用圖中的引物
①④
①④
組合可擴(kuò)增出T-DNA兩側(cè)的未知序列。
（3）若只使用一種引物，通過(guò)PCR技術(shù)制備與T-DNA的b鏈相同的單鏈作為某些檢測(cè)的探針，則所選擇引物由5'→3'的前5個(gè)堿基序列為
5′-CTGTC-3′
5′-CTGTC-3′
。
（4）對(duì)PCR產(chǎn)物測(cè)序，經(jīng)分析得到了圖1中的未知序列。下列DNA單鏈序列中（虛線處省略了部分核苷酸序列），可能正確的是
A
A
。
A．5'-TCGACCACG___ATGTCGA-3'
B．5-AATTCCATG_CTGAATT-3'
C．5'-GCAATGCGT_TCGGGAA-3'
D．5'-TTGATACGC___CGAGTAC-3'
（5）PCR技術(shù)擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列后，擴(kuò)增產(chǎn)物可用
瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳
技術(shù)進(jìn)行鑒定。

【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．

【答案】Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）；將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端；T-DNA基因兩端已知的堿基序列；①④；5′-CTGTC-3′；A；瓊脂糖凝膠電泳

【解答】

【點(diǎn)評(píng)】

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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：9引用：1難度：0.5

相似題

1．PCR是利用體內(nèi)DNA復(fù)制的原理，進(jìn)行生物體外復(fù)制特定 DNA片段的核酸合成技術(shù)。請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題：
（1）PCR反應(yīng)的基本步驟是變性、

、

。
（2）科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn) DNA聚合酶只能催化

方向的聚合反應(yīng)。圖1表示細(xì)胞內(nèi)染色體 DNA的半保留復(fù)制過(guò)程，有一條子鏈?zhǔn)窍群铣啥痰腄NA片段（稱為岡崎片段），再形成較長(zhǎng)的分子，可推測(cè)參與以上過(guò)程的酶有DNA聚合酶、

、

。在PCR過(guò)程中無(wú)岡崎片段形成，原因是細(xì)胞內(nèi)染色體 DNA的復(fù)制過(guò)程特點(diǎn)是

，PCR過(guò)程的特點(diǎn)是

。
（3）雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與脫氧核苷三磷酸（dNTP）的結(jié)構(gòu)如圖2所示。已知 ddNTP按堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式加到正在復(fù)制的子鏈中后，子鏈的延伸立即終止?，F(xiàn)有一些序列為5'-GCCTAAGATCGCA-3'的DNA分子單鏈片段，通過(guò)PCR技術(shù)獲得以堿基“C”為末端（3'為堿基C）不同長(zhǎng)度的子鏈DNA片段，將以上子鏈 DNA片段進(jìn)行電泳分離可得到

種不同長(zhǎng)度的子鏈 DNA片段。為使實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，在PCR反應(yīng)管中除了單鏈模板、引物、DNA 聚合酶和相應(yīng)的緩沖液等物質(zhì)外，還需要加入下列哪組原料

。
A.dGTP，dATP，dTTP
B.dGTP、dATP、dTTP、dCTP、ddCTP
C.dGTP，dATP，dTTP，dCTP
D.ddGTP，ddATP，ddTTP，ddCTP
（4）如圖3為形成單鏈DNA后，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增示意圖。

催化①過(guò)程的酶是

；核酸酶H的作用是

。如果某RNA單鏈中一共有80個(gè)堿基，其中C有15個(gè)，A與U之和占該鏈堿基含量的40%，經(jīng)過(guò)以上若干過(guò)程后共獲得8個(gè)雙鏈 DNA，此過(guò)程中至少需加入G參與組成的核苷酸數(shù)量為

（以上過(guò)程不考慮引物）。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：19引用：1難度：0.7
解析
2．PCR是利用體內(nèi)DNA復(fù)制的原理，進(jìn)行生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題：

（1）PCR反應(yīng)的基本步驟是變性、復(fù)性、

。
（2）雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與脫氧核苷三磷酸（dNTP）的結(jié)構(gòu)如圖2所示。已知ddNTP按堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式加到正在復(fù)制的子鏈中后，子鏈的延伸立即終止?，F(xiàn)主有一些序列為5'-GCCTAAGATCGCA-3'的DNA分子單鏈片段，通過(guò)PCR技術(shù)獲得以堿基“C”為末端（3'為堿基C）不同長(zhǎng)度的子鏈DNA片段，將以上子鏈DNA片段進(jìn)行電泳分離可得到

種不同長(zhǎng)度的子鏈DNA片段。為使實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，在PCR反應(yīng)管中除了單鏈模板、引物、DNA聚合酶和相應(yīng)的緩沖液等物質(zhì)外，還需要加入下列哪組原料

。
A．dGTP、dATP、dTTP
B．dGTR、dATP、dTTP、dCTP、ddCTP
C．dGTP、dATP、dTTP、dCTP
D．ddGTP、ddATP、ddTTP、ddCTP
（3）科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)DNA聚合酶只能催化

方向的聚合反應(yīng)。圖1表示細(xì)胞內(nèi)染色體DNA的復(fù)制過(guò)程，有一條子鏈?zhǔn)窍群铣啥痰腄NA片段（稱為岡崎片段），再形成較長(zhǎng)的分子，可推測(cè)參與以上過(guò)程的酶有DNA連接酶

、

。在PCR過(guò)程中無(wú)岡崎片段形成，原因是細(xì)胞內(nèi)染色體DNA的復(fù)制過(guò)程特點(diǎn)是

，PCR過(guò)程的特點(diǎn)是

。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：12引用：1難度：0.7
解析
3．Sanger法DNA測(cè)序技術(shù)的核心原理：由于雙脫氧核苷酸（ddNTP）的2'和3'都不含羥基，其在DNA的合成過(guò)程中不能形成磷酸二酯鍵，因此可以中斷DNA分子合成反應(yīng)。在四個(gè)含有4種脫氧核苷酸（dNTP）的DNA體外合成反應(yīng)體系中分別加入一定比例帶有放射性同位素標(biāo)記的ddNTP（分別為：ddATP，ddCTP，ddGTP和ddTTP），在PCR過(guò)程中復(fù)制隨機(jī)終止，產(chǎn)生四組不同長(zhǎng)度的一系列終止處帶有標(biāo)記的DNA片段。然后在變性凝膠（加入尿素等堿性物質(zhì)）上進(jìn)行電泳和放射自顯影后，可以根據(jù)電泳帶的位置確定待測(cè)分子的DNA序列，具體過(guò)程見(jiàn)圖。
注：ddA是ddATP的縮寫形式。

（1）如圖1中Ⅰ過(guò)程橫線①中應(yīng)該加入的物質(zhì)是

，dNTP中dATP與ATP在組成上的區(qū)別是

，為什么該過(guò)程中需要添加引物？
（2）材料中提到“在變性凝膠上進(jìn)行電泳……”，請(qǐng)解釋“變性”

，為什么要變性處理？

。
（3）如果電泳結(jié)果如圖2所示，請(qǐng)寫出待測(cè)DNA分子的序列

。
（4）某同學(xué)要通過(guò)PCR技術(shù)獲得被³²P標(biāo)記且以堿基“C”為末端、不同長(zhǎng)度的子鏈DNA片段，在反應(yīng)管中已經(jīng)有模板、引物、酶和相應(yīng)緩沖液等等，還需加入哪些原料

。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：16引用：1難度：0.7
解析

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