異丁醇具有燃值高、能量密度高等優(yōu)點(diǎn)，其開(kāi)發(fā)和利用對(duì)優(yōu)化我國(guó)能源結(jié)構(gòu)和保護(hù)環(huán)境有非常重要的意義。科研人員構(gòu)建了一種表達(dá)載體pUC18（如圖1）導(dǎo)入酵母菌，用于過(guò)量表達(dá)ILV2、ILV5、ILV3、AR010基因，以期實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)異丁醇。圖2是酵母細(xì)胞中葡萄糖代謝產(chǎn)生異丁醇、乙醇和乙酸的示意圖，其中基因ADHs和ALDs分別控制E酶和F酶的合成?；卮鹣铝袉?wèn)題：
?
（1）將基因ILV2、ILV5、ILV3和AR010依次插入到質(zhì)粒上的目的基因插入位點(diǎn)，選用高表達(dá)啟動(dòng)子pTEF1和

終止子

終止子

作為調(diào)控序列。pTEF1是

RNA聚合酶

RNA聚合酶

識(shí)別并結(jié)合的位點(diǎn)。
（2）科研人員先將pUC18轉(zhuǎn)化到大腸桿菌細(xì)胞中，以便篩選、保存和擴(kuò)增重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒上的

原核

原核

（填“真核”或“原核”）生物復(fù)制原點(diǎn)使pUC18能在大腸桿菌中擴(kuò)增。已知氨芐青霉素抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，pUC18中氨芐青霉素抗性基因的作用是

作為標(biāo)記基因用于篩選出含有重組質(zhì)粒（或目的基因）的大腸桿菌細(xì)胞

作為標(biāo)記基因用于篩選出含有重組質(zhì)粒（或目的基因）的大腸桿菌細(xì)胞

。
（3）提取完整的重組pUC18并導(dǎo)入組氨酸缺陷型釀酒酵母細(xì)胞中，將菌株接種在培養(yǎng)基中以獲得單菌落，該過(guò)程稱(chēng)為微生物的

選擇

選擇

培養(yǎng)。除必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，該選擇培養(yǎng)基中需要添加的物質(zhì)是

C

C

。
A．組氨酸
B．氨芐青霉素
C．瓊脂
（4）根據(jù)圖示酵母細(xì)胞葡萄糖的代謝途徑，為了進(jìn)一步提高異丁醇的產(chǎn)量，應(yīng)對(duì)基因

ADHs和ALDs

ADHs和ALDs

進(jìn)行改造使其表達(dá)產(chǎn)物減少。