研究人員從土壤中分離獲得能分解纖維素的細(xì)菌（A菌），從A菌中提取一種纖維素酶基因（CBHⅡ）并進行PCR擴增，然后與高效表達載體pUT質(zhì)粒（圖1）連接構(gòu)建成重組質(zhì)粒并導(dǎo)入A菌，從而獲得分解纖維素能力更強的工程菌（B菌）?；卮鹣铝袉栴}：

（1）采用PCR技術(shù)擴增CBHⅡ基因時需要根據(jù)

CBHⅡ基因兩端的堿基（核苷酸）序列

CBHⅡ基因兩端的堿基（核苷酸）序列

設(shè)計引物，每一輪擴增耐高溫的DNA聚合酶都從子鏈的

3'

3'

（填“3′”或“5′”）端將子鏈延伸。
（2）圖1中pUT質(zhì)粒上的高效表達啟動子的作用是

啟動目的基因（CBHⅡ基因）的轉(zhuǎn)錄

啟動目的基因（CBHⅡ基因）的轉(zhuǎn)錄

，CBHⅡ基因兩端需添加相關(guān)酶切位點（有關(guān)限制酶的識別序列和酶切位點如上表所示）才能與pUT質(zhì)粒連接，因此在擴增CBHⅡ基因時，需要在兩種引物上分別添加

AGATCT

AGATCT

序列和

GGTAACC

GGTAACC

序列。
（3）為鑒定重組質(zhì)粒是否構(gòu)建成功，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入A菌，并將其接種在含

抗生素N

抗生素N

的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，然后提取3個不同菌落的質(zhì)粒分別進行雙酶切驗證將酶切片段和CBHⅡ基因分別進行電泳，結(jié)果如圖2所示。據(jù)圖分析，菌落

2，3

2，3

中成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒，理由是

菌落2、3的質(zhì)粒經(jīng)雙酶切后電泳條帶中都有與CBHⅡ基因相同的條帶

菌落2、3的質(zhì)粒經(jīng)雙酶切后電泳條帶中都有與CBHⅡ基因相同的條帶

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