研究人員從土壤中分離獲得能分解纖維素的細(xì)菌（A菌），從A菌中提取一種纖維素酶基因（CBHⅡ）并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后與高效表達(dá)載體pUT質(zhì)粒（圖1）連接構(gòu)建成重組質(zhì)粒并導(dǎo)入A菌，從而獲得分解纖維素能力更強(qiáng)的工程菌（B菌）?；卮鹣铝袉栴}：
（1）采用PCR技術(shù)擴(kuò)增CBHⅡ基因時(shí)需要根據(jù)
CBHⅡ基因兩端的堿基（核苷酸）序列
CBHⅡ基因兩端的堿基（核苷酸）序列
設(shè)計(jì)引物，每一輪擴(kuò)增耐高溫的DNA聚合酶都從子鏈的 3'
3'
（填“3′”或“5′”）端將子鏈延伸。
（2）圖1中pUT質(zhì)粒上的高效表達(dá)啟動(dòng)子的作用是 啟動(dòng)目的基因（CBHⅡ基因）的轉(zhuǎn)錄
啟動(dòng)目的基因（CBHⅡ基因）的轉(zhuǎn)錄
，CBHⅡ基因兩端需添加相關(guān)酶切位點(diǎn)（有關(guān)限制酶的識(shí)別序列和酶切位點(diǎn)如上表所示）才能與pUT質(zhì)粒連接，因此在擴(kuò)增CBHⅡ基因時(shí)，需要在兩種引物上分別添加 AGATCT
AGATCT
序列和 GGTAACC
GGTAACC
序列。
（3）為鑒定重組質(zhì)粒是否構(gòu)建成功，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入A菌，并將其接種在含 抗生素N
抗生素N
的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，然后提取3個(gè)不同菌落的質(zhì)粒分別進(jìn)行雙酶切驗(yàn)證將酶切片段和CBHⅡ基因分別進(jìn)行電泳，結(jié)果如圖2所示。據(jù)圖分析，菌落 2，3
2，3
中成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒，理由是 菌落2、3的質(zhì)粒經(jīng)雙酶切后電泳條帶中都有與CBHⅡ基因相同的條帶
菌落2、3的質(zhì)粒經(jīng)雙酶切后電泳條帶中都有與CBHⅡ基因相同的條帶
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