噬菌體輔助連續(xù)進(jìn)化技術(shù)（PACE）將生物分子的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)化與噬菌體M13的生命周期結(jié)合在一起（該噬菌體的生命周期僅為10分鐘），使實(shí)驗(yàn)室中生物分子的進(jìn)化速度提高了100倍。該技術(shù)有望讓制藥業(yè)使用實(shí)驗(yàn)室培育出來的蛋白質(zhì)、核酸等成分按需制藥。
噬菌體M13的增殖依賴于pⅢ蛋白。PACE技術(shù)，首先用某目的基因替換原來的pⅢ蛋白基因，構(gòu)建含有目的基因的pⅢ蛋白缺陷型噬菌體（SP），然后用SP侵染培養(yǎng)池中的宿主E.coli（其質(zhì)粒中含有與目的基因活性相關(guān)聯(lián)的pⅢ蛋白基因）。SP必須進(jìn)化出有效突變才能啟動質(zhì)粒上pⅢ蛋白基因的表達(dá)，噬菌體才能獲得增殖能力并持續(xù)侵染其他宿主，從而實(shí)現(xiàn)連續(xù)進(jìn)化（過程如圖所示）。

請回答以下問題：
（1）獲取目的基因后，常用

PCR

PCR

技術(shù)對其進(jìn)行快速擴(kuò)增。構(gòu)建pⅢ蛋白缺陷型噬菌體（SP）的遺傳改造過程需要用到的工具酶有

限制酶、DNA連接酶

限制酶、DNA連接酶

，SP侵染宿主E.coli的過程相當(dāng)于基因工程基本操作程序中的

將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

。
（2）宿主E.coli的輔助質(zhì)粒（AP）包含有與目的基因活性相關(guān)聯(lián)的pⅢ蛋白基因，是為了對噬菌體（SP）進(jìn)行

篩選

篩選

。除此之外，AP還應(yīng)包含有

啟動子

啟動子

才能驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA。
（3）研究人員向PACE的培養(yǎng)池不斷引流入新鮮的宿主細(xì)胞，并設(shè)置培養(yǎng)液流出速度稍快于宿主細(xì)胞的增殖速度，其目的是

使獲得有效突變的噬菌體在培養(yǎng)池中富集并進(jìn)行連續(xù)進(jìn)化

使獲得有效突變的噬菌體在培養(yǎng)池中富集并進(jìn)行連續(xù)進(jìn)化

。