重組蛋白疫苗相當(dāng)于把病毒最有效的抗原成分的基因整合到酵母菌、大腸桿菌等微生物細(xì)胞或某些特定動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，然后在體外大量培養(yǎng)，表達(dá)出病毒的特定蛋白，再收獲、提純?cè)撎囟ǖ鞍?，最后制成疫苗。如圖為Real-timePCR過(guò)程圖，當(dāng)熒光物質(zhì)（F）游離出來(lái)才能發(fā)出熒光，通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度，可以達(dá)到檢測(cè) PCR產(chǎn)物擴(kuò)增量的目的。（注：聚合酶能催化磷酸二酯鍵的生成和斷裂。）請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）基因工程中獲取目的基因的方法除從相關(guān)的已知結(jié)構(gòu)和功能清晰的基因中進(jìn)行篩選外，常用方法還有

人工合成目的基因

人工合成目的基因

和利用PCR技術(shù)擴(kuò)增。
（2）上述 Real-time PCR反應(yīng)過(guò)程中，使用的材料包括

耐高溫的DNA聚合酶（或Taq酶）、四種脫氧核苷酸、DNA模板

耐高溫的DNA聚合酶（或Taq酶）、四種脫氧核苷酸、DNA模板

（答出兩點(diǎn)即可）、合適的緩沖液，引物以及探針?；旌虾玫腜CR反應(yīng)體系，在熱循環(huán)儀中進(jìn)行由

變性、復(fù)性和延伸

變性、復(fù)性和延伸

組成的多次循環(huán)過(guò)程，即可進(jìn)行DNA的大量擴(kuò)增。
（3）探針完整時(shí)，熒光物質(zhì)（F）所發(fā)出的熒光會(huì)被猝滅物質(zhì)（Q）吸收，經(jīng)過(guò)第1、2步引物和探針均與模板鏈結(jié)合，請(qǐng)仔細(xì)觀察上圖的第2、3步，解釋通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度，可以達(dá)到檢測(cè)PCR產(chǎn)物擴(kuò)增量目的的原因是

當(dāng)探針完整時(shí)，熒光物質(zhì)（F）受到猝滅物質(zhì)（Q）的制約不能發(fā)出熒光，當(dāng)探針被聚合酶分解后，熒光物質(zhì)游離出來(lái)，發(fā)出熒光信號(hào)，代表一條子鏈的產(chǎn)生，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光信號(hào)形成，所以可以通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度，達(dá)到檢測(cè)PCR產(chǎn)物擴(kuò)增量的目的

當(dāng)探針完整時(shí)，熒光物質(zhì)（F）受到猝滅物質(zhì)（Q）的制約不能發(fā)出熒光，當(dāng)探針被聚合酶分解后，熒光物質(zhì)游離出來(lái)，發(fā)出熒光信號(hào)，代表一條子鏈的產(chǎn)生，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光信號(hào)形成，所以可以通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度，達(dá)到檢測(cè)PCR產(chǎn)物擴(kuò)增量的目的

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（4）質(zhì)粒作為基因工程常用的載體工具，應(yīng)具備的基本條件有

有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)；在受體細(xì)胞中能自我復(fù)制；含有特殊的標(biāo)記基因等

有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)；在受體細(xì)胞中能自我復(fù)制；含有特殊的標(biāo)記基因等

（答出兩點(diǎn)即可），而作為基因表達(dá)載體，除滿足上述基本條件外，還需具有

啟動(dòng)子和終止子

啟動(dòng)子和終止子

，若受體細(xì)胞為動(dòng)物細(xì)胞，則動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的氣體條件是

95%空氣+5%CO₂的混合氣體

95%空氣+5%CO₂的混合氣體

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