人呼吸道合胞病毒(HRSV)是一種單鏈RNA病毒,圖1是構建人呼吸道合胞病毒基因組載體的示意圖,如表是相關限制酶的識別序列及切割位點,請回答:
限制酶 |
BclⅠ |
EcoRⅠ |
XbaⅠ |
Sau3AⅠ |
BamHⅠ |
識別序列及切割位點 |
T↓GATCA |
G↓AATTC |
T↓CTAGA |
↓GATC |
G↓GATCC |
(1)HRSV的基因組為-RNA,入侵細胞后在
RNA聚合酶
RNA聚合酶
的催化下合成+RNA。
(2)過程②設計引物時在兩種引物的5′端分別添加
Xba I和BamH I
Xba I和BamH I
酶的識別序列。過程③需要用
Xba I和 Bcl I
Xba I和 Bcl I
酶切割質粒A。
(3)過程④將質粒B導入大腸桿菌,有利于
質粒B準確復制,穩(wěn)定保存,方便提取
質粒B準確復制,穩(wěn)定保存,方便提取
,需要用
CaCl2(Ca2+)
CaCl2(Ca2+)
處理大腸桿菌。
(4)為制備減毒突變株,科研人員將單個突變堿基引入HRSV基因組cDNA質??寺≈?,流程如圖2。已知在細菌體內合成的DNA分子有甲基化修飾,通過PCR擴增的DNA鏈無甲基化修飾。
①DpnⅠ識別甲基化的GATC四個堿基序列,因此其能將
a、b鏈
a、b鏈
水解消化掉。在大腸桿菌細胞內完成缺刻修復需要
DNA連接
DNA連接
酶。
②已知質粒B為a個,經過程①擴增15個循環(huán),需要突變引物
15a
15a
個,將過程②形成的產物全部轉入大腸桿菌后復制n輪,得到雙鏈突變的DNA
15a?2n-1
15a?2n-1
個。