人呼吸道合胞病毒（HRSV）是一種單鏈RNA病毒，圖1是構建人呼吸道合胞病毒基因組載體的示意圖，如表是相關限制酶的識別序列及切割位點，請回答：

限制酶	BclⅠ	EcoRⅠ	XbaⅠ	Sau3AⅠ	BamHⅠ
識別序列及切割位點	T↓GATCA	G↓AATTC	T↓CTAGA	↓GATC	G↓GATCC

（1）HRSV的基因組為-RNA，入侵細胞后在

RNA聚合酶

RNA聚合酶

的催化下合成+RNA。
（2）過程②設計引物時在兩種引物的5′端分別添加

Xba I和BamH I

Xba I和BamH I

酶的識別序列。過程③需要用

Xba I和 Bcl I

Xba I和 Bcl I

酶切割質粒A。
（3）過程④將質粒B導入大腸桿菌，有利于

質粒B準確復制，穩(wěn)定保存，方便提取

質粒B準確復制，穩(wěn)定保存，方便提取

，需要用

CaCl₂（Ca²⁺）

CaCl₂（Ca²⁺）

處理大腸桿菌。
（4）為制備減毒突變株，科研人員將單個突變堿基引入HRSV基因組cDNA質?？寺≈?，流程如圖2。已知在細菌體內合成的DNA分子有甲基化修飾，通過PCR擴增的DNA鏈無甲基化修飾。
①DpnⅠ識別甲基化的GATC四個堿基序列，因此其能將

a、b鏈

a、b鏈

水解消化掉。在大腸桿菌細胞內完成缺刻修復需要

DNA連接

DNA連接

酶。
②已知質粒B為a個，經過程①擴增15個循環(huán)，需要突變引物

15a

15a

個，將過程②形成的產物全部轉入大腸桿菌后復制n輪，得到雙鏈突變的DNA

15a?2^n-1

15a?2^n-1

個。