蜂毒前溶血肽原是prepromelittin基因（以下簡(jiǎn)稱PL基因）的表達(dá)產(chǎn)物，在蜜蜂體內(nèi)合成后首先加工成蜂毒溶血肽原（蜂毒肽前體蛋白），被進(jìn)一步水解形成分泌蛋白蜂毒肽。與蜂毒肽相比，蜂毒前溶血肽原具有較大的溶解度，且對(duì)細(xì)胞的破壞能力小，可利用基因工程方法合成蜂毒肽的前體產(chǎn)物。
（1）生產(chǎn)蜂毒肽常選用微生物做受體細(xì)胞，優(yōu)點(diǎn)是
微生物生理結(jié)構(gòu)和遺傳物質(zhì)簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，生長(zhǎng)繁殖快、容易進(jìn)行遺傳物質(zhì)操作
微生物生理結(jié)構(gòu)和遺傳物質(zhì)簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，生長(zhǎng)繁殖快、容易進(jìn)行遺傳物質(zhì)操作
（答出兩點(diǎn)即可）；原核細(xì)胞 不能
不能
（填“能“或“不能“）將蜂毒溶血肽原加工成蜂毒肽，原因是 原核細(xì)胞無(wú)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，無(wú)法對(duì)表達(dá)出的蜂毒前溶血肽原進(jìn)行加工
原核細(xì)胞無(wú)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，無(wú)法對(duì)表達(dá)出的蜂毒前溶血肽原進(jìn)行加工
。
（2）為了解決（1）中的問題，對(duì)蜂毒前溶血肽原基因進(jìn)行改造（如圖1），以便后期用羥胺（一種能專一性裂解特定兩個(gè)氨基酸之間肽鍵的化合物）對(duì)生產(chǎn)出的蜂毒前溶血肽原進(jìn)行加工。根據(jù)圖1推測(cè)羥胺的識(shí)別位點(diǎn)是 Asn-Gly（NG丙氨酸-甘氨酸）
Asn-Gly（NG丙氨酸-甘氨酸）
。為實(shí)現(xiàn)最終生產(chǎn)有活性的蜂毒肽，與原DNA序列相比，改造后的序列末端還刪除了Gly的對(duì)應(yīng)編碼鏈序列，推測(cè)刪除的理由是 有活性的蜂毒肽末端沒有甘氨酸
有活性的蜂毒肽末端沒有甘氨酸
。改造后的DNA編碼區(qū)序列長(zhǎng)度為 213
213
bp。
注：①陰影：蜂毒肽序列；方框：Asn-Gly位點(diǎn)；
②圖1中所示的“原DNA序列”為蜂毒前溶血肽原的編碼區(qū)序列的編碼鏈；
③甲硫氨酸，縮寫為M，由起始密碼子AUG編碼；丙氨酸（Asn），縮寫為N；
④甘氨酸（Gly），縮寫為G，由密碼子GGU、GGC、GGA、GGG編碼。
⑤終止密碼子UAA、UGA和UAG
（3）根據(jù)改造后的基因序列，利用人工化學(xué)合成方法進(jìn)行全基因合成，設(shè)計(jì)并合成引物對(duì)合成基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物序列的長(zhǎng)度越長(zhǎng)、GC含量越高，PCR過程中退火溫度的設(shè)定值越 高
高
。將PCR產(chǎn)物和pGEX-4T-1載體利用酶 EcoRI、SalI和DNA連接酶（限制酶+DNA連接酶）
EcoRI、SalI和DNA連接酶（限制酶+DNA連接酶）
進(jìn)行基因表達(dá)載體的構(gòu)建，獲得蜂毒前溶血肽原與GST（一種標(biāo)簽蛋白）融合表達(dá)重組質(zhì)粒pGEX-4T-1/PPMe（見圖2）。擴(kuò)增PL基因時(shí)設(shè)計(jì)了引物對(duì)M1和M2，其中M1的部分序列是：5'-GAATTC-3'且EcoRⅠ的識(shí)別序列是GAATTC，請(qǐng)續(xù)寫出該引物的后8個(gè)堿基5'ATGAAATT
ATGAAATT
3'。
（4）將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化至 不含有
不含有
（“含有“或“不含有”）pGEX-4T-1/PPMel的大腸桿菌的感受態(tài)細(xì)胞，借助PCR和電泳鑒定是否轉(zhuǎn)化成功：凝膠中DNA分子的遷移速率與 大?。ㄩL(zhǎng)度），構(gòu)象（形狀），電荷，凝膠濃度，電壓
大?。ㄩL(zhǎng)度），構(gòu)象（形狀），電荷，凝膠濃度，電壓
有關(guān)（答2點(diǎn)）。
（5）若培育相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因植物；常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，需將目的基因插入質(zhì)粒的 T-DNA
T-DNA
中，最后通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因植株。
