某研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改造乳酸桿菌，將其添加于飼料中，以提高家禽養(yǎng)殖效益?？莶菅挎邨U菌可分泌一種可降解纖維素的酶，這種酶由W基因編碼。為在乳酸桿菌中表達W基因，需以圖1中質(zhì)粒為載體將W基因?qū)肴樗釛U菌，圖2為含W基因的DNA片段?；卮鹣铝袉栴}：
（1）采用PCR技術(shù)可以大量擴增W基因，該過程包括將W基因解鏈（變性）、引物與單鏈相應(yīng)互補序列結(jié)合引物與單鏈相應(yīng)互補序列結(jié)合（復(fù)性）和在 耐高溫的DNA聚合酶（或Taq酶）耐高溫的DNA聚合酶（或Taq酶）作用下合成互補子鏈（延伸）。
（2）不同生物的DNA能夠連接的原因是其分子結(jié)構(gòu)相似、基本組成單位相同且均遵循 堿基互補配對堿基互補配對原則。將W基因與圖1所示的載體連接前應(yīng)使用限制酶 EcoRI、HindⅢEcoRI、HindⅢ切割圖2中含W基因的DNA片段和載體，相對于單酶切，這種方法的優(yōu)點是 避免目的基因和載體的自身環(huán)化以及反向連接（合理即可）避免目的基因和載體的自身環(huán)化以及反向連接（合理即可）。
（3）所得重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化乳酸桿菌后，使用含 氨芐青霉素氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選，以得到轉(zhuǎn)入W基因的乳酸桿菌。由于載體上的啟動子往往具有物種特異性，W基因上游的啟動子應(yīng)選擇 乳酸桿菌乳酸桿菌（填“枯草芽孢桿菌”“乳酸桿菌”或“枯草芽孢桿菌或乳酸桿菌”）的啟動子。
（4）為確定只有導(dǎo)入重組質(zhì)粒的乳酸桿菌才具有分解纖維素的能力，研究人員用液體培養(yǎng)基分別培養(yǎng)下表所示菌種，取培養(yǎng)液的上清液測定酶活力，實驗方案及測定結(jié)果如下表所示，表中的X應(yīng)為 導(dǎo)入普通質(zhì)粒的乳酸桿菌導(dǎo)入普通質(zhì)粒的乳酸桿菌。
| 菌種 | 酶活性相對值 |
| 乳酸桿菌 | 未檢出 |
| X | 未檢出 |
| 導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的乳酸桿菌 | 0.96 |
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】引物與單鏈相應(yīng)互補序列結(jié)合；耐高溫的DNA聚合酶（或Taq酶）；堿基互補配對；EcoRI、HindⅢ；避免目的基因和載體的自身環(huán)化以及反向連接（合理即可）；氨芐青霉素；乳酸桿菌；導(dǎo)入普通質(zhì)粒的乳酸桿菌
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：23引用：1難度：0.5
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