轉(zhuǎn)座子是指能從基因組的一個(gè)位置移動(dòng)到另一個(gè)位置的DNA片段。Ac片段能編碼轉(zhuǎn)座酶，DS片段需在轉(zhuǎn)座酶作用下，才可以從原來的位置上切離下來，然后隨機(jī)插入到所在染色體的其他位置或其他染色體上。

（1）用

限制性核酸內(nèi)切酶或者限制酶，DNA 連接

限制性核酸內(nèi)切酶或者限制酶，DNA 連接

酶將DS片段構(gòu)建在Ti質(zhì)粒的T-DNA片段上，再用含有該重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻，自交篩選獲得DS-T-DNA純合體（甲）。以同樣方法獲得Ac-T-DNA純合體水稻（乙）。
（2）甲、乙雜交獲得Ac/Ds雙因子轉(zhuǎn)座系統(tǒng)水稻，在其后代中篩選到一些淡綠葉突變體。利用淡綠葉突變體與野生型水稻進(jìn)行系列雜交實(shí)驗(yàn)，

F₂或者子二

F₂或者子二

代獲得野生型和淡綠葉水稻植株分別為442株和130株，分離比符合 3：1，初步推測(cè)淡綠葉突變是單基因的

隱

隱

性突變。將442株野生型植株單株收獲和播種，后代發(fā)生性狀分離的植株占

2

3

2

3

，則進(jìn)一步確認(rèn)上述推測(cè)。
（3）為進(jìn)一步確定突變性狀與Ds切離轉(zhuǎn)座的相關(guān)性，設(shè)計(jì)6種引物（如圖1），對(duì)上述572株子代的T-DNA進(jìn)行Ds轉(zhuǎn)座的PCR檢測(cè)。
①檢測(cè)原理：Ds未發(fā)生切離的DNA位點(diǎn)，通過引物

b 和 d

b 和 d

可得到400bp的擴(kuò)增產(chǎn)物；Ds已發(fā)生切離的DNA位點(diǎn)通過引物c和d可得到870bp的擴(kuò)增產(chǎn)物。
②擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果如圖2，據(jù)此判斷

B

B

類型為淡綠葉突變體。若A類型：B類型：C類型=

2：1：1

2：1：1

，則突變性狀產(chǎn)生與Ds片段的切離轉(zhuǎn)座有關(guān)。