回答與基因工程和植物克隆有關(guān)的問題：
HIV感染已成為威脅人類健康及社會發(fā)展的主要問題之一，臨床實驗證實，HIV殼體蛋白病毒樣顆粒能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生特異的體液和細(xì)胞免疫。植物表達(dá)系統(tǒng)屬于真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，利用植物生產(chǎn)重組蛋白具有很多優(yōu)點，包括：降低攜帶動物性病原體的危險性，易于純化，不需特殊的運輸和儲藏條件，植物培養(yǎng)基價格低廉降低生產(chǎn)成本等，因此被認(rèn)為是一個比微生物或動物更理想的蛋白生產(chǎn)系統(tǒng)?？茖W(xué)家們將經(jīng)過改造的融合基因轉(zhuǎn)入枸杞細(xì)胞，建立利用轉(zhuǎn)基因枸杞根系分泌表達(dá)特定HIV殼體蛋白的反應(yīng)系統(tǒng)。
（1）通過長期研究后，科學(xué)家已經(jīng)測定該融合基因的堿基序列，下面為利用PCR儀進(jìn)行PCR的操作步驟請完善相關(guān)步驟內(nèi)容。
a.按配方準(zhǔn)備好各組分。
b.用微量移液器依次加入各組分。
c.進(jìn)行離心離心，使反應(yīng)液集中在微量離心管底部。
（2）若采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入目的基因，需先將融合基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的控制質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)移的基因控制質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)移的基因中，再通過農(nóng)桿菌的侵染將重組DNA分子轉(zhuǎn)入枸杞細(xì)胞中。此過程中影響轉(zhuǎn)化效率的因素除了溫度、培養(yǎng)時間等環(huán)境因素外還有農(nóng)桿菌的種類、數(shù)量農(nóng)桿菌的種類、數(shù)量、受體細(xì)胞的基因型受體細(xì)胞的基因型。（答出2點即可）將成功導(dǎo)入目的基因的枸杞細(xì)胞進(jìn)行植物組織培養(yǎng)前需將其轉(zhuǎn)入添加抗生素抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以除去附著的農(nóng)桿菌。枸杞根系分泌表達(dá)HIV殼體蛋白的缺點是根系的生長較為緩慢，為了獲得大量表達(dá)產(chǎn)物，可以對相應(yīng)細(xì)胞進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)液體懸浮培養(yǎng)。
（3）枸杞植株在多次繼代培養(yǎng)后可能會喪失細(xì)胞全能性的表達(dá)能力，可能是由于細(xì)胞或組織中的激素平衡激素平衡被打破，或細(xì)胞對外源生長物質(zhì)的敏感性外源生長物質(zhì)的敏感性發(fā)生改變。
【答案】離心；控制質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)移的基因；農(nóng)桿菌的種類、數(shù)量；受體細(xì)胞的基因型；抗生素；液體懸浮培養(yǎng)；激素平衡；外源生長物質(zhì)的敏感性
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：25引用：1難度：0.7
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1．紅豆杉富含紫杉醇，是一種重要的抗癌藥物。請回答與紅豆杉組織培養(yǎng)及轉(zhuǎn)基因有關(guān)的問題：
（1）在進(jìn)行紅豆杉愈傷組織誘導(dǎo)和培養(yǎng)時，最好取春季新長出的莖葉，經(jīng)處理后才能接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。形成的愈傷組織細(xì)胞在顯微鏡下觀察通常是不定形態(tài)的，原因是。為增加愈傷組織的數(shù)量，可以將培養(yǎng)瓶中的愈傷組織切下，接種至新的相同培養(yǎng)基上進(jìn)行。
（2）可從固體培養(yǎng)基中篩選生長良好的愈傷組織，接種至含液體培養(yǎng)基的三角瓶中在搖床上振蕩培養(yǎng)，細(xì)胞的生長速度和紫杉醇含量和培養(yǎng)的溫度、pH、光照條件、培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)及細(xì)胞遺傳特性有關(guān)外，還受的影響。在植物細(xì)胞不斷再培養(yǎng)的過程中容易發(fā)生（可遺傳變異類型）等變化，這會導(dǎo)致細(xì)胞全能性的喪失。
（3）將外源基因?qū)胫参锛?xì)胞有多種途徑：以經(jīng)改造的農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒為，通過寄主感染受體植物的途徑將外源基因轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞；也可通過將外源基因直接導(dǎo)入受體細(xì)胞；還可以將外源DNA包裹在人工合成的脂質(zhì)體中，通過與融合完成細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：26引用：1難度：0.7 -
2．某同學(xué)在學(xué)習(xí)“細(xì)胞工程”時，列表比較了動植物細(xì)胞工程的有關(guān)內(nèi)容，你認(rèn)為有幾處不正確（ ?。?br />
植物細(xì)胞工程 動物細(xì)胞工程 技術(shù)手段 植物組織培養(yǎng)、植物體細(xì)胞雜交等 動物細(xì)胞培養(yǎng)和融合等 特殊處理 酶解法去除細(xì)胞壁 胃蛋白酶處理得到細(xì)胞懸浮液 融合方法 物理方法、化學(xué)方法、生物方法 物理方法、化學(xué)方法和生物方法 典型應(yīng)用 無病毒植物的培育、人工種子、種間植物雜交等 單克隆抗體的制備等 培養(yǎng)基區(qū)別 所用的糖必須為葡萄糖 所用的糖為葡萄糖且動物血清不可缺少 發(fā)布：2024/5/27 14:0:0組卷：14引用：4難度：0.7 -
3．雞干擾素是一種具有高效和廣譜抗病毒作用的細(xì)胞因子，廣泛用于動物領(lǐng)域的抗病毒治療?？蒲腥藛T將雞干擾素基因作為目的基因，構(gòu)建重組質(zhì)粒，導(dǎo)入煙草，以獲得抗病毒煙草?；卮饐栴}：
（1）已知雞干擾素基因的核苷酸序列，則可采用方法獲得目的基因，對其進(jìn)行克隆常采用技術(shù)。
（2）重組質(zhì)粒中應(yīng)有RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，該部位稱為。
（3）由于細(xì)胞壁的存在，植物的組織培養(yǎng)和克隆有一定的難度，故常用（方法）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入煙草細(xì)胞的，再進(jìn)行培養(yǎng)。待重新長出細(xì)胞壁，形成胚性細(xì)胞，此時，應(yīng)該培養(yǎng)基中甘露醇的濃度，以利于胚性細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)形成細(xì)胞團(tuán)，然后經(jīng)兩條途徑形成轉(zhuǎn)基因煙草植株。該轉(zhuǎn)基因煙草植株在多次繼代培養(yǎng)后，會（“保持”或“喪失”）細(xì)胞全能性的表達(dá)。
（4）若轉(zhuǎn)基因煙草植株對病毒的侵染表現(xiàn)出一定的抗性，但抗性較低，可能原因是。發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：28引用：1難度：0.7
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