人體肝臟細胞中的乙醛脫氫酶2（ALDH2）是人體酒精代謝中的關(guān)鍵酶。如圖表示利用基因工程生產(chǎn)ALDH2過程中使用的質(zhì)粒及目的基因的部分結(jié)構(gòu)，β-半乳糖苷酶能分解無色的X-gal產(chǎn)生藍色物質(zhì)。圖中氨芐青霉素抗性基因、β-半乳糖苷酶基因、目的基因的序列中分別含有1種、5種、2種限制酶的識別序列及切割位點。

（1）構(gòu)建基因表達載體時一般至少需要兩種限制酶，以防止

質(zhì)?；蚰康幕蜃陨憝h(huán)化

質(zhì)?；蚰康幕蜃陨憝h(huán)化

和

目的基因與質(zhì)粒反向連接

目的基因與質(zhì)粒反向連接

。設(shè)計啟動子的作用是

使目的基因正常轉(zhuǎn)錄（表達）

使目的基因正常轉(zhuǎn)錄（表達）

。
（2）為了使目的基因與載體能正確連接，應(yīng)在擴增的目的基因A、B兩端分別引入

XhoⅠ

XhoⅠ

和

MunⅠ

MunⅠ

兩種不同限制酶的識別序列。
（3）MunⅠ酶切后的末端與EcoRⅠ酶切后的末端能連接，原因是

MunⅠ酶與EcoRI酶切后的黏性末端相同（可以互補配對）

MunⅠ酶與EcoRI酶切后的黏性末端相同（可以互補配對）

。
（4）以大腸桿菌為受體細胞，在篩選插入ALDH2基因成功的受體細胞時，除營養(yǎng)物質(zhì)外，還要在培養(yǎng)基中加入的物質(zhì)有

氨芐青霉素和X-gal

氨芐青霉素和X-gal

。
（5）研究發(fā)現(xiàn)如果將ALDH2的第36位的氨基酸替換，可提高其催化效率。請寫出通過蛋白質(zhì)工程技術(shù)獲取高效ALDH2基因的操作流程：

從預期的蛋白質(zhì)功能（高效ALDH2）出發(fā)→設(shè)計預期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)（高效ALDH2結(jié)構(gòu)）→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列

從預期的蛋白質(zhì)功能（高效ALDH2）出發(fā)→設(shè)計預期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)（高效ALDH2結(jié)構(gòu)）→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列

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