如圖1是限制酶BamHⅠ與BglⅡ的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)示意圖,圖2表示質(zhì)粒pZHZ11(總長(zhǎng)為3.8kb,1kb=1000對(duì)堿基)的結(jié)構(gòu),其中,Ap′為鏈霉素抗性基因,lacZ基因編碼β-半乳糖苷酶,該酶催化生成的化合物能將白色的大腸桿菌染成藍(lán)色。請(qǐng)分析回答問(wèn)題:
(1)圖1表明,酶的作用具有專(zhuān)一專(zhuān)一性,利用圖2構(gòu)建成基因表達(dá)載體,還必須加入的組成元件是目的基因目的基因。
(2)若先用限制酶BamHⅠ切開(kāi)pZHZ11,然后滅活BamHⅠ酶,再加DNA連接DNA連接酶進(jìn)行連接,最后將連接物導(dǎo)入足夠數(shù)量的大腸桿菌細(xì)胞中,則可使細(xì)胞呈藍(lán)色的質(zhì)粒的最短長(zhǎng)度是3.8kb3.8kb。
(3)若將兩端分別用限制酶BamHⅠ和BglⅡ切開(kāi)的單個(gè)目的基因片段置換pZHZ11中0.5kb的BamHⅠ酶切片段,形成4.9kb的重組質(zhì)粒,則目的基因長(zhǎng)度為1.61.6kb。
(4)上述4.9kb的重組質(zhì)粒有兩種形式,若用BamHⅠ和EcoRⅠ聯(lián)合酶切其中一種,只能獲得1.6kb和3.3kb兩種DNA片段;那么聯(lián)合酶切同等長(zhǎng)度的另一種重組質(zhì)粒,則可獲得1.71.7kb和3.23.2kb兩種DNA片段。
(5)若pZHZ11上基因表達(dá)時(shí)的堿基序列方向是逆時(shí)針的,為使目的基因定向插入,并獲得在含鏈霉素的培養(yǎng)基上存活且顯白色的大腸桿菌,則切割目的基因編碼區(qū)下游的限制酶應(yīng)為BamHI或BglⅡBamHI或BglⅡ(從題圖涉及的限制酶中選擇)。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】專(zhuān)一;目的基因;DNA連接;3.8kb;1.6;1.7;3.2;BamHI或BglⅡ
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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