人類胰島素基因位于第11號染色體上,長度為8416bp,人類胰島素的氨基酸序列已知?;卮鹣铝邢嚓P問題。
(1)如圖是利用PCR技術獲取人胰島素基因的方法,除了此方法外,還可以利用的方法是 從基因文庫獲取或人工合成從基因文庫獲取或人工合成。
(2)利用PCR技術獲取人胰島素基因,在緩沖液中除了要添加模板和引物外,還需要添加的物質有 四種脫氧核苷酸和熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)四種脫氧核苷酸和熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)。
(3)至少經過 33輪循環(huán)可以得到所需的目的基因,一個DNA分子經過5輪循環(huán),需要引物A 3131個,從PCR的過程和DNA分子的特點,試著寫出設計引物需要注意的問題:引物自身不能有互補序列 引物之間不能有互補序列引物自身不能有互補序列 引物之間不能有互補序列、引物長度適當、引物能與目的基因兩側特異性結合、避免與擴增DNA內有過多互補的序列引物長度適當、引物能與目的基因兩側特異性結合、避免與擴增DNA內有過多互補的序列(答出2點即可)。
(4)利用瓊脂糖凝膠電泳分離不同DNA分子,遷移速率與 凝膠的濃度、DNA分子的大小和構象凝膠的濃度、DNA分子的大小和構象,(寫出3點)等有關。
(5)利用圖示方法獲取的目的基因,直接構建基因表達載體后導入大腸桿菌,不能不能(填“能”或“不能”)表達出人胰島素,理由是 因為此方法獲得的目的基因中含有內含子,大腸桿菌無法正常識別內含子而對內含子部分轉錄的mRNA進行翻譯,導致合成的蛋白質出現(xiàn)錯誤因為此方法獲得的目的基因中含有內含子,大腸桿菌無法正常識別內含子而對內含子部分轉錄的mRNA進行翻譯,導致合成的蛋白質出現(xiàn)錯誤。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定;基因工程的操作過程綜合.
【答案】從基因文庫獲取或人工合成;四種脫氧核苷酸和熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶);3;31;引物自身不能有互補序列 引物之間不能有互補序列;引物長度適當、引物能與目的基因兩側特異性結合、避免與擴增DNA內有過多互補的序列;凝膠的濃度、DNA分子的大小和構象;不能;因為此方法獲得的目的基因中含有內含子,大腸桿菌無法正常識別內含子而對內含子部分轉錄的mRNA進行翻譯,導致合成的蛋白質出現(xiàn)錯誤
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/6/22 8:0:10組卷:5引用:1難度:0.6
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限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識別序列及切割位點 T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
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