蟬花是我國(guó)的一種傳統(tǒng)中藥材，是蟬擬青霉寄生于蟬若蟲后形成的蟲菌復(fù)合體，在其胞內(nèi)含蟲草多糖、甘露醇、蟲草素及必需氨基酸等，這些物質(zhì)通常作為保健品以及部分醫(yī)用藥品的成分。為了提高產(chǎn)量，研究人員嘗試從天然蟬花中分離純化出蟬擬青霉菌株進(jìn)行人工培養(yǎng)，請(qǐng)回答以下問題：
（1）制備培養(yǎng)基
①該實(shí)驗(yàn)選擇馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA），配制培養(yǎng)基的一般步驟：

計(jì)算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板

計(jì)算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板

，倒平板后要將平板倒置，其主要目的是

防止培養(yǎng)基中水分過(guò)快地?fù)]發(fā)，防止冷凝的水珠落到培養(yǎng)基上，造成污染

防止培養(yǎng)基中水分過(guò)快地?fù)]發(fā)，防止冷凝的水珠落到培養(yǎng)基上，造成污染

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②為了便于篩選蟬擬青霉菌株，培養(yǎng)基中還應(yīng)加入鏈霉素以抑制

細(xì)菌

細(xì)菌

的生長(zhǎng)，按功能劃分，該培養(yǎng)基屬于

選擇

選擇

培養(yǎng)基。
（2）蟬花真菌的分離、純化
①取新鮮蟬花，用75%乙醇進(jìn)行消毒，取胸腔中菌體少許接種至PDA培養(yǎng)基，然后置于

恒溫培養(yǎng)箱

恒溫培養(yǎng)箱

中25℃培養(yǎng)3～5d,平板上會(huì)形成菌落，研究人員可以根據(jù)菌落的特征對(duì)蟬花菌種進(jìn)行鑒定，主要依據(jù)是

不同菌形成菌落的形狀、大小、隆起程度、顏色等一般不同

不同菌形成菌落的形狀、大小、隆起程度、顏色等一般不同

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②待菌落長(zhǎng)至0.2～0.5cm時(shí)挑選少量菌絲進(jìn)行純化，純化的方法有

平板劃線法和稀釋涂布平板法

平板劃線法和稀釋涂布平板法

，純化2-4次確定無(wú)雜菌后，最后采用

甘油管藏法

甘油管藏法

的方法進(jìn)行長(zhǎng)期保存。
（3）發(fā)酵生產(chǎn)
發(fā)酵生產(chǎn)中常用液體培養(yǎng)基，為檢測(cè)蟬花真菌發(fā)酵液滅菌是否徹底的常用方法是

取少量發(fā)酵液涂布到牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上，適宜溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察有無(wú)菌落產(chǎn)生

取少量發(fā)酵液涂布到牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上，適宜溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察有無(wú)菌落產(chǎn)生

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