某動物肝臟合成的P蛋白具有抑制癌細胞增殖的作用，為建立在大腸桿菌中高效表達的工程菌，研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了相關信息即該蛋白的基因編碼序列（簡稱P基因），大小為1.5kb,請補充完善以下實驗思路：
（1）為獲取P基因，提取該動物 肝臟細胞肝臟細胞（癌細胞、肝細胞）的 總RNA總RNA，再經逆轉錄酶催化得到cDNA，將其作為PCR反應的模板，并設計一對特異性引物來擴增P基因。
（2）圖甲為所選用的載體示意圖，其中限制酶的識別序列及切割位點見表。為了實現(xiàn)目的基因和運載體的 定向連接定向連接，選擇 PvitII和EcoRⅠPvitII和EcoRⅠ限制酶的識別序列來切割。已知P基因序列內部和兩端不含圖甲中限制酶的識別序列，在PCR擴增的P基因，兩種引物的 5′5′端分別引入上述兩種限制酶的識別序列。再將這兩種限制酶切割的P基因和載體進行連接時，可選用 T4DNA連接酶T4DNA連接酶（E.coliDNA連接酶、T4DNA連接酶），在目的基因和運載體片段間形成 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵。
表：相關限制酶的識別序列及切割位點
| 名稱 | 識別序列及切割位點 | 名稱 | 識別序列及切割位點 |
| HindⅢ | ↓AAGCTTTTCGAA↑ | EcoRⅠ | ↓GAATTCCTTAAG↑ |
| PvitⅡ | ↓CAGCTGGTCGAC↑ | PstⅠ | ↓CTGCAGGACGTC↑ |
| KpnⅠ | ↓GGTACCCCATGG↑ | BamHⅠ | ↓GGATCCCCTAGG↑ |
?（3）轉化前需用
CaCl2溶液或鈣離子溶液
CaCl2溶液或鈣離子溶液
處理大腸桿菌細胞，以提高轉化效率?；蚬こ痰氖荏w細胞若是植物細胞常采用 農桿菌轉化法
農桿菌轉化法
。（4）將轉化后的大腸桿菌接種在含
氨芐青霉素
氨芐青霉素
的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，隨機挑取菌落（分別編號為1、2、3、4）培養(yǎng)并提取質粒，用構建基因表達載體時所選用的限制酶進行酶切，徹底酶切產物需通過 瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳
分離，結果如圖乙，2
2
號菌落的質粒很可能是含目的基因的重組質粒。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】肝臟細胞；總RNA；定向連接；PvitII和EcoRⅠ；5′；T4DNA連接酶；磷酸二酯鍵；CaCl2溶液或鈣離子溶液；農桿菌轉化法；氨芐青霉素；瓊脂糖凝膠電泳；2
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/5/22 8:0:8組卷：13引用：2難度：0.5
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7