目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細(xì)菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒,pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體,其主要結(jié)構(gòu)如圖一所示.
(1)構(gòu)建人工質(zhì)粒時(shí)要有抗性基因,以便于篩選(鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞)篩選(鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞).
(2)pBR32Z分子中有單個(gè)EcoRI限制酶作用位點(diǎn),EcoR 1只能識別序列一GAATTC一,并只能在G與A之間切割.若在某目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)EcoRI的切點(diǎn),請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端..
(3)pBR322分子中另有單個(gè)的BamHI限制酶作用位點(diǎn),現(xiàn)將經(jīng)BamHI處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BgIⅡ處理得到的目的基因,通過DNA連接酶作用恢復(fù)鍵,成功的獲得了重組質(zhì)粒.說明限制酶BamHⅠ和限制酶BglⅡ的酶切產(chǎn)物具有相同末端限制酶BamHⅠ和限制酶BglⅡ的酶切產(chǎn)物具有相同末端.
(4)為了檢測上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無ampR和tetR的大腸桿菌,將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng),得到如圖二的菌落.再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上,使絨布面沾上菌落,然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng),得到如圖三的結(jié)果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置).與圖三空圈相對應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是能抗氨芐青霉素,但不能抗四環(huán)素能抗氨芐青霉素,但不能抗四環(huán)素,圖三結(jié)果顯示,多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是既能抗氨芐青霉素,又能抗四環(huán)素的pBR322質(zhì)粒既能抗氨芐青霉素,又能抗四環(huán)素的pBR322質(zhì)粒.
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合.
【答案】篩選(鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞);;限制酶BamHⅠ和限制酶BglⅡ的酶切產(chǎn)物具有相同末端;能抗氨芐青霉素,但不能抗四環(huán)素;既能抗氨芐青霉素,又能抗四環(huán)素的pBR322質(zhì)粒
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:17引用:5難度:0.5
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