CRISPP/Ces9是一種高效的基因編輯技術(shù)，通過(guò)切割DNA雙鏈以敲除目標(biāo)基因或插入新的基因?？茖W(xué)家構(gòu)建了如圖所示的兩種質(zhì)粒，并包埋于脂質(zhì)體中，然后將脂質(zhì)體加入含受體細(xì)胞的培養(yǎng)皿中，實(shí)現(xiàn)了基因轉(zhuǎn)移?；卮鹣铝袉?wèn)題：

（1）研究發(fā)現(xiàn)CRISPR-Cas9系統(tǒng)廣泛存在于細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)，推測(cè)該系統(tǒng)在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的作用是

切割外源DNA，保護(hù)自身

切割外源DNA，保護(hù)自身

。CRISPR-Cas系統(tǒng)中 Cas9蛋白具有內(nèi)切酶活性，水解目標(biāo)DNA的

磷酸二酯鍵

磷酸二酯鍵

（填化學(xué)鍵）。
（2）實(shí)驗(yàn)中利用脂質(zhì)體能實(shí)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)移的原理

生物膜具有一定的流動(dòng)性

生物膜具有一定的流動(dòng)性

。24 h后在培養(yǎng)皿中添加

抗生素G418和嘌呤霉素

抗生素G418和嘌呤霉素

篩選并進(jìn)行單細(xì)胞培養(yǎng)，經(jīng)檢測(cè)后即可得到基因編輯后的細(xì)胞。此過(guò)程須在37℃，氣體環(huán)境為95%空氣+5% CO₂的裝置中進(jìn)行。
（3）轉(zhuǎn)染好的細(xì)胞用裂解液消化后，使用RNA提取試劑盒提取總RNA，使用反轉(zhuǎn)試劑盒選行逆轉(zhuǎn)錄，最終得到

cDNA

cDNA

，再進(jìn)行PCR。進(jìn)行PCR時(shí)，a個(gè)雙鏈DNA經(jīng)過(guò)n輪擴(kuò)增，理論上至少需要的引物數(shù)量為

（2ⁿ⁺¹-2）a

（2ⁿ⁺¹-2）a

。